三七總皂苷對(duì)前交叉韌帶重建術(shù)后早期腱骨愈合界面的影響.pdf

1、目的:探索三七總皂苷對(duì)前交叉韌帶重建術(shù)后早期腱骨愈合界面的影響。
　　方法:實(shí)驗(yàn)材料及分組成年新西蘭大白兔（北京海淀區(qū)興旺實(shí)驗(yàn)動(dòng)養(yǎng)殖場(chǎng)）27只，雄性，取材前實(shí)驗(yàn)動(dòng)物運(yùn)動(dòng)良好，可奔跑，未見(jiàn)關(guān)節(jié)腫脹、跛行等異常。膝關(guān)節(jié)前抽屜試驗(yàn)均為陰性。27只新西蘭大白兔隨機(jī)分為a）空白對(duì)照組;b）陽(yáng)性對(duì)照組;c）實(shí)驗(yàn)組。每組9只。
　　造模方法用3％戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射麻醉(1ml/kg)。膝關(guān)節(jié)屈曲，髕骨內(nèi)側(cè)入路切開關(guān)節(jié)囊，暴露關(guān)節(jié)腔。髕

2、骨向外側(cè)脫位，屈膝切除髕下脂肪墊，暴露趾長(zhǎng)伸肌腱及髁間窩交叉韌帶。向上牽拉趾長(zhǎng)伸肌腱，在其肌肉肌腱結(jié)合處切斷，保留股骨外髁止點(diǎn)。趾長(zhǎng)伸肌腱斷端以1/0絲線編織牽引，作為移植物。切斷前交叉韌帶，制作前交叉韌帶損傷模型。脛骨隧道入口在脛骨結(jié)節(jié)內(nèi)側(cè)5mm，出點(diǎn)位于前交叉韌帶脛骨足印處。經(jīng)脛骨隧道，從髁間窩股骨外髁內(nèi)壁鉆股骨隧道，入點(diǎn)為前交叉韌帶止點(diǎn)，出點(diǎn)在股骨外上髁附近皮質(zhì)。隧道直徑2mm。導(dǎo)針牽引移植物斷端，由上向下依次通過(guò)股骨隧道、髁間窩

3、、脛骨隧道。拉緊移植物、牽引縫線縫合于脛骨結(jié)節(jié)皮質(zhì)固定，完成前交叉韌帶重建。
　　腱骨界面干預(yù)措施各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物完成模型建立后，分別給予干預(yù)措施。藥物均采用局部注射的干預(yù)方法，于術(shù)后一次性注射。a）空白對(duì)照組不給予干預(yù)措施;b）陽(yáng)性對(duì)照組給予VEGF1mg干預(yù);c）實(shí)驗(yàn)組給予三七總皂苷1mg干預(yù)。
　　術(shù)后處理膝關(guān)節(jié)無(wú)菌敷料覆蓋，繃帶包扎。術(shù)后的新西蘭大白兔均分籠喂養(yǎng)，膝關(guān)節(jié)不固定，自由活動(dòng)。觀察并記錄傷口情況及其步態(tài)。術(shù)后3

4、天每天肌注青霉素40萬(wàn)單位。飼養(yǎng)溫度:22℃-24℃，濕度40％-70％。
　　標(biāo)本切片及染色3組分別在術(shù)后2、4、6周各處死3只大白兔。每組每個(gè)時(shí)段3只大白兔含6個(gè)標(biāo)本，每個(gè)標(biāo)本為包含股骨段全長(zhǎng)隧道的股骨外髁。股骨隧道全長(zhǎng)附帶股骨外髁標(biāo)本，10％的福爾馬林固定，EDTA脫鈣、石蠟包埋，切片機(jī)切片(厚度約5um)。所有切片均行常規(guī)HE染色，Masson染色，免疫組化Ⅰ型膠原染色，免疫組化CD34染色，免疫組化VEGF染色，免疫組化

5、VEGHR染色。
　　觀察指標(biāo)通過(guò)HE染色，CD34染色，VEGF染色，VEGHR染色觀察腱骨愈合界面血供的影響。通過(guò)HE染色，masson染色，Ⅰ型膠原染色觀察腱骨愈合界面膠原纖維的影響。通過(guò)HE染色，masson染色觀察腱骨愈合界面骨形成的影響。
　　結(jié)果:
　　1.三七總皂苷對(duì)前交叉韌帶重建術(shù)后早期血供的影響。
　　HE染色血管計(jì)數(shù)
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第2周血管計(jì)數(shù)單因素方差分析，空白

6、組(56.38±36.55)，VEGF組(110.47±39.27)，三七總皂苷組(79.43±50.49)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(62.58)，VEGF組平均秩次(121.72)，三七總皂苷組平均秩次(87.21)，P（Kruskal-Wallis Test）＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中VEGF組在前交叉重建術(shù)后腱骨愈合界

7、面2周血管計(jì)數(shù)最多，其次為三七總皂苷組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第4周血管計(jì)數(shù)單因素方差分析，空白組(79.25±29.08)，VEGF組(82.38±37.73)，三七總皂苷組(163.78±71.74)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(68.06)，VEGF組平均秩次(71.28)，三七總皂苷組平均秩次(132.16)，P（K

8、ruskal-Wallis Test）＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后4周腱骨愈合界面血管計(jì)數(shù)最多，其次為VEGF組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第6周血管計(jì)數(shù)單因素方差分析，空白組(63.08±43.37)，VEGF組(122.20±77.00)，三七總皂苷組(133.08±75.00)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis T

9、est示，空白組平均秩次(59.76)，VEGF組平均秩次(101.4)，三七總皂苷組平均秩次(110.34)，P（Kruskal-Wallis Test）＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后6周腱骨愈合界面血管計(jì)數(shù)最多，其次為VEGF組。
　　CD34染色血管計(jì)數(shù)
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第2周血管計(jì)數(shù)單因素方差分析，空白組(61.67±11.24)，VEGF組(127.33±2

10、4.58)，三七總皂苷組(150.33±10.60)，三組P(Levene Statistic)＞0.05，方差齊、P＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后腱骨愈合界面2周血管計(jì)數(shù)最多，其次為VEGF組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第4周血管計(jì)數(shù)單因素方差分析，空白組(78.00±1.73)，VEGF組(220.67±22.72)，三七總皂苷組(172.67±16.92)，三組P(Leven

11、e Statistic)＞0.05，方差齊、P＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中VEGF組在前交叉重建術(shù)后4周腱骨愈合界面血管計(jì)數(shù)最多，其次為三七總皂苷組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第6周血管計(jì)數(shù)單因素方差分析，空白組(92.00±3.61)，VEGF組(157.33±43.66)，三七總皂苷組(47.00±12.12)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis

12、 Test示，空白組平均秩次(5.00)，VEGF組平均秩次(8.00)，三七總皂苷組平均秩次(2.00)，P（Kruskal-Wallis Test）＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中VEGF組在前交叉重建術(shù)后6周腱骨愈合界面血管計(jì)數(shù)最多。
　　VEGF染色評(píng)分
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面VEGF染色評(píng)分結(jié)果。前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第2周VEGF染色評(píng)分單因素方差分析，空白組(1.67±0.81)，

13、VEGF組(4.67±1.51)，三七總皂苷組(6.00±0.00)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(3.67)，VEGF組平均秩次(10.83)，三七總皂苷組平均秩次(14.00)，P(Kruskal-WallisTest)＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后腱骨愈合界面2周染色評(píng)分最高，其次為VEGF組。

14、>　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第4周VEGF染色評(píng)分單因素方差分析，空白組(2.33±1.97)，VEGF組(5.50±1.23)，三七總皂苷組(6.17±1.60)，三組P(Levene Statistic)＞0.05，方差齊、P＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后4周腱骨愈合界面染色評(píng)分最高，其次為VEGF組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第6周血管計(jì)數(shù)單因素方差分析，空白組(2.

15、83±1.60)，VEGF組(5.33±1.03)，三七總皂苷組(7.50±1.64)，三組P(Levene Statistic)＞0.05，方差齊，P＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后6周腱骨愈合界面血管染色評(píng)分最高，其次為VEGF組。
　　VEGHR染色評(píng)分
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面VEGHR染色血管計(jì)數(shù)結(jié)果。前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第2周染色評(píng)分單因素方差分析，空白組

16、(4.50±1.23)，VEGF組(6.50±1.23)，三七總皂苷組(5.67±0.82)，三組P(Levene Statistic)＞0.05，方差齊、P＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中VEGF組在前交叉重建術(shù)后腱骨愈合界面2周染色評(píng)分最多，其次為三七總皂苷組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第4周染色評(píng)分單因素方差分析，空白組(3.67±1.51)，VEGF組(5.33±1.03)，三七總皂苷組(6.00±0.

17、00)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(5.17)，VEGF組平均秩次(10.33)，三七總皂苷組平均秩次(13.00)，P(Kruskal-Wallis Test)＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后4周腱骨愈合界面染色評(píng)分最多，其次為VEGF組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第6周染色評(píng)分單因素方差

18、分析，空白組(5.33±1.03)，VEGF組(7.00±1.55)，三七總皂苷組(8.00±1.64)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(5.83)，VEGF組平均秩次(10.67)，三七總皂苷組平均秩次(12.00)，P（Kruskal-Wallis Test）＞0.05，說(shuō)明三組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明前交叉重建術(shù)后腱骨愈合界面6周腱骨愈合界面染

19、色評(píng)分三組無(wú)明顯差異。
　　2.三七總皂苷對(duì)前交叉韌帶重建術(shù)后早期膠原纖維的影響。
　　HE染色膠原纖維
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面HE染色膠原纖維結(jié)果。前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第2周膠原纖維單因素方差分析，空白組(24.98±13.70)，VEGF組(28.70±13.96)，三七總皂苷組(24.10±8.98)，三組P(LeveneStatistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis

20、 Test示，空白組平均秩次(85.08)，VEGF組平均秩次(99.61)，三七總皂苷組平均秩次(86.82)，P(Kruskal-Wallis Test)＞0.05，說(shuō)明三組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明前交叉重建術(shù)后腱骨愈合界面2周膠原纖維三組無(wú)明顯差異。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第4周膠原纖維單因素方差分析，空白組(22.62±9.79)，VEGF組(25.23±10.04)，三七總皂苷組(29.00±11.41)，三組

21、P(Levene Statistic)＞0.05，方差齊、P＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后4周腱骨愈合界面膠原纖維最多，其次為VEGF組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第6周膠原纖維單因素方差分析，空白組(14.70±4.97)，VEGF組(27.10±11.56)，三七總皂苷組(27.30±6.22)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-W

22、allis Test示，空白組平均秩次(43.53)，VEGF組平均秩次(108.68)，三七總皂苷組平均秩次(119.29)，P（Kruskal-Wallis Test）＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后6周腱骨愈合界面膠原纖維最多，其次為VEGF組。
　　Ⅰ型膠原纖維
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第2周Ⅰ型膠原染色單因素方差分析，空白組(29.03±5.59)，VEGF組(37.

23、53±5.14)，三七總皂苷組(49.43±9.72)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(20.37)，VEGF組平均秩次(45.55)，三七總皂苷組平均秩次(70.58)，P（Kruskal-Wallis Test）＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后腱骨愈合界面2周膠原纖維最多，其次為VEGF組。
　　前交

24、叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第4周膠原纖維單因素方差分析，空白組(36.67±6.35)，VEGF組(43.70±9.46)，三七總皂苷組(51.07±12.90)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(27.80)，VEGF組平均秩次(48.63)，三七總皂苷組平均秩次(60.07)，P（Kruskal-Wallis Test）＜0.05，說(shuō)明三組之間有

25、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后4周腱骨愈合界面膠原纖維最多，其次為VEGF組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第6周膠原纖維單因素方差分析，空白組(48.63±7.43)，VEGF組(72.87±12.41)，三七總皂苷組(79.37±12.96)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(18.22)，VEGF組平均秩次(53.32

26、)，三七總皂苷組平均秩次(64.97)，P（Kruskal-Wallis Test）＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后6周腱骨愈合界面膠原纖維最多，其次為VEGF組。
　　masson染色膠原纖維
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第2周膠原纖維單因素方差分析，空白組(26.60±5.00)，VEGF組(44.43±7.33)，三七總皂苷組(51.07±8.95)，三組P(Levene S

27、tatistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(16.28)，VEGF組平均秩次(53.55)，三七總皂苷組平均秩次(66.67)，P(Kruskal-Wallis Test)＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后腱骨愈合界面2周膠原纖維最多，其次為VEGF組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第4周膠原纖維單因素方差分析，空白組(32.23±4.

28、70)，VEGF組(46.23±9.52)，三七總皂苷組(56.43±11.99)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(18.90)，VEGF組平均秩次(50.65)，三七總皂苷組平均秩次(66.95)，P（Kruskal-Wallis Test）＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后4周腱骨愈合界面膠原纖維最多，其次為

29、VEGF組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第6周膠原纖維單因素方差分析，空白組(42.90±6.78)，VEGF組(58.43±10.79)，三七總皂苷組(63.83±9.80)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(20.40)，VEGF組平均秩次(53.08)，三七總皂苷組平均秩次(63.02)，P(Kruskal-Wallis Test

30、)＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后6周腱骨愈合界面膠原纖維最多，其次為VEGF組。
　　3.三七總皂苷對(duì)前交叉韌帶重建術(shù)后早期骨形成的影響。
　　HE染色骨形成
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第2周骨形成單因素方差分析，空白組(21.12±8.16)，VEGF組(28.48±16.44)，三七總皂苷組(44.50±17.90)，三組P(Levene Statistic)＜0.0

31、5，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(57.99)，VEGF組平均秩次(82.3)，三七總皂苷組平均秩次(131.21)，P(Kruskal-Wallis Test)＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后腱骨愈合界面2周骨形成最多，其次為VEGF組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第4周骨形成單因素方差分析，空白組(36.68±9.40)，VEGF組(43.10

32、±10.35)，三七總皂苷組(59.67±15.09)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(56.93)，VEGF組平均秩次(81.58)，三七總皂苷組平均秩次(132.99)，P（Kruskal-Wallis Test）＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后4周腱骨愈合界面骨形成最多，其次為VEGF組。
　　前交

33、叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第6周骨形成單因素方差分析，空白組(50.25±8.87)，VEGF組(67.68±15.07)，三七總皂苷組(76.02±18.67)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(48.68)，VEGF組平均秩次(101.05)，三七總皂苷組平均秩次(121.77)，P(Kruskal-Wallis Test)＜0.05，說(shuō)明三組之

34、間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后6周腱骨愈合界面骨形成最多，其次為VEGF組。
　　masson染色骨形成
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第2周骨形成單因素方差分析，空白組(35.40±4.77)，VEGF組(52.67±21.17)，三七總皂苷組(73.97±14.73)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示，空白組平均秩次(24.93

35、)，VEGF組平均秩次(42.88)，三七總皂苷組平均秩次(68.68)，P(Kruskal-Wallis Test)＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后腱骨愈合界面2周骨形成最多，其次為VEGF組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第4周骨形成單因素方差分析，空白組(45.83±9.12)，VEGF組(66.73±12.9)，三七總皂苷組(74.93±14.43)，三組P(Levene Sta

36、tistic)＞0.05，方差齊、P＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后4周腱骨愈合界面骨形成最多，其次為VEGF組。
　　前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面第6周骨形成單因素方差分析，空白組(54.03±11.00)，VEGF組(67.03±25.04)，三七總皂苷組(100.83±21.90)，三組P(Levene Statistic)＜0.05，方差不齊、Kruskal-Wallis Test示

37、，空白組平均秩次(25.67)，VEGF組平均秩次(40.17)，三七總皂苷組平均秩次(70.67)，P（Kruskal-Wallis Test）＜0.05，說(shuō)明三組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中三七總皂苷組在前交叉重建術(shù)后6周腱骨愈合界面骨形成最多，其次為VEGF組。
　　結(jié)論:1.三七總皂苷對(duì)前交叉韌帶重建術(shù)后早期腱骨愈合界面的血供有促進(jìn)作用。三七總皂苷組對(duì)前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面術(shù)后第4周，第6周新生血管生成較空白組和VEGF

38、組有明顯的促進(jìn)作用，其作用機(jī)制可能主要與促進(jìn)多種細(xì)胞因子分泌，促進(jìn)新生血管形成有關(guān)。
　　2.三七總皂苷能促進(jìn)前交叉重建術(shù)后早期腱骨愈合界面膠原纖維的形成。三七總皂苷對(duì)前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨愈合界面術(shù)后第2周，第4周，第6周膠原纖維的形成較空白組和VEGF組有明顯的促進(jìn)作用，其作用機(jī)制可能主要與促進(jìn)Ⅰ型膠原大量合成，最終促進(jìn)膠原纖維形成有關(guān)。
　　3.三七總皂苷能促進(jìn)前交叉韌帶重建術(shù)后早期腱骨愈合界面骨形成。三七總皂苷對(duì)前交