人脂肪源干細(xì)胞在促進(jìn)兔前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨界面愈合的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探討移植人脂肪源干細(xì)胞能否促進(jìn)前交叉韌帶重建術(shù)后腱骨界面的愈合。
　　方法：
　　將48只體重2.5-3.0kg的雌性新西蘭大白兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組各24只。取同側(cè)半腱肌作為供體肌腱，建立單側(cè)下肢前交叉韌帶重建動(dòng)物模型，實(shí)驗(yàn)組和對照分別在脛骨和股骨隧道中注射hASCs和等量的生理鹽水。分別在術(shù)后2、4和8周取材，收集脛骨-移植韌帶-股骨標(biāo)本行組織學(xué)和生物力學(xué)檢測。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　

2、本實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，運(yùn)用SPSS20.0軟件，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)檢測各數(shù)據(jù)間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05表示為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.人脂肪源干細(xì)胞的鑒定
　　流式細(xì)胞結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞表面抗體CD90(99.5％)，，CD51(96.8％)，CD105(91.1％)為陽性表達(dá);CD34(10.6％)，CD45(10.7％)，CD49e(12.2％)為陰性表達(dá)。

3、r>　　2.ALP染色結(jié)果
　　堿性磷酸酶染色結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組陽性染色較對照組陽性染色明顯，通過軟件Image-pro plus6.0對染色圖片進(jìn)行半定量分析，半定量結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組單位面積上累計(jì)光密度值(IOD/Area)較對照組顯著增高且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.0257)。
　　3.qRT-PCR檢測相關(guān)成骨基因的表達(dá)
　　與對照組相比，OCN基因表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，OPN基因表達(dá)是對照組的6.8倍(P=0.018)，R

4、UNX2基因表達(dá)是對照組的2.6倍(P=0.015)，ALP基因表達(dá)是對照3.1倍(P=0.019)，Collagen-1基因表達(dá)是對照組的4.1倍(P=0.043)且都有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.組織學(xué)分析
　　4.1HE染色結(jié)果
　　HE染色結(jié)果顯示對照組術(shù)后2周腱骨界面主要以炎性細(xì)胞浸潤為主，4周時(shí)減少，術(shù)后8周時(shí)在腱骨界面形成以纖維結(jié)締組織為主的間接止點(diǎn)結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后4周在腱骨界面可見少量纖維軟骨細(xì)胞和骨細(xì)胞，術(shù)

5、后8周時(shí)有新生骨形成，在腱骨界面處形成直結(jié)止點(diǎn)。
　　4.2Masson's trichrome染色結(jié)果
　　Masson's trichrome染色結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組與對照組術(shù)后2周時(shí)主要以炎性細(xì)胞浸潤為主。實(shí)驗(yàn)組術(shù)后4周在腱骨界面處可見纖維軟骨細(xì)胞及纖維結(jié)締組織形成，術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組腱骨界面處可有新生骨及致密結(jié)締組織形成而對照組無新生骨形成。
　　5.生物力學(xué)分析
　　從生物力學(xué)數(shù)據(jù)分析可知，術(shù)后2周實(shí)驗(yàn)組最大載荷

6、(21.02±8.30N vs12.36±7.67N，p=0.09)大于空白對照組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。術(shù)后4周(87.52±10.29N vs14.76±4.10N,P＜0.01)、8周(126.31±12.85N vs47.0±12.81N，P＜0.01)實(shí)驗(yàn)組最大載荷均大于空白對照組且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。術(shù)后2周(9.76±5.07N/mm vs7.85±4.11N/mm，P=0.49)、8周(37.18±5.62N/mm vs30.28

7、±23.86N/mm，P=0.51)實(shí)驗(yàn)組移植肌腱剛度大于空白對照組移植肌腱的的剛度，但都無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在術(shù)后4周時(shí)(27.80±7.24N/mm vs8.98±4.12，P＜0.01)，實(shí)驗(yàn)組移植肌腱的剛度大于空白對照組且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.hASCs在體外成骨誘導(dǎo)環(huán)境下可向成骨方向分化，具有一定的成骨能力；
　　2.組織學(xué)染色結(jié)果顯示人脂肪源干細(xì)胞能促進(jìn)腱骨界面的骨化，促進(jìn)腱骨界面向直接止點(diǎn)轉(zhuǎn)化；<