癌蛋白DEPDC1在肝癌細胞系HepG2中的作用及.pdf

1、目的：
　　DEPDC1是包含一個DEP結(jié)構(gòu)域的癌蛋白，除在睪丸中表達外，在其他正常人體組織中被很難檢測到。已有研究表明DEPDC1在膀胱癌、乳腺癌、非小細胞肺癌及肝癌等多種癌中高表達。DEPDC1在膀胱癌中的作用研究得比較清楚，最近的研究發(fā)現(xiàn)鋅指蛋白224（zinc finger protein224,ZNF224）是與DEPDC1發(fā)揮功能相關(guān)的重要蛋白，在體內(nèi)和體外實驗表明，用干擾多肽（DEPDC1的第611至628位氨基酸序

2、列，并在其N端加上11個精氨酸，簡寫為11R-DEP：611-628）阻斷兩者形成復(fù)合物，則能顯著降低細胞的生存能力。但到目前為止，DEPDC1在肝癌中的具體功能及機制尚不清楚。本研究旨在探尋癌蛋白DEPDC1在肝癌細胞HepG2的的作用及機制，為肝細胞癌的臨床治療提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　?。?）運用Western blot檢測DEPDC1在肝癌細胞系中的表達。
　?。?）通過MTT實驗篩選出對HepG2細胞生長

3、抑制最適的藥物濃度。
　?。?）利用干擾多肽抑制DEPDC1在HepG2細胞中的功能，通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)。
　?。?）在干擾多肽組和對照多肽組處理HepG2細胞后，運用Tunel染色法檢測HepG2細胞的增殖及凋亡。
　?。?）在干擾多肽和對照多肽處理HepG2細胞后，在3h、6h、12h和24h處收集細胞及提取蛋白，運用Western blot檢測casepase-3和cleaved casepase-3的表達。

4、
　?。?）在干擾多肽和對照多肽處理HepG2細胞后，在1h、6h及12h時運用熒光染色定位NF-κB因子，并在熒光顯微鏡下觀察NF-κB在細胞內(nèi)的分布情況。
　　（7）干擾多肽干預(yù)處理HepG2細胞后，運用Western blot檢測DEPDC1的表達。
　　結(jié)果：
　?。?）Western blot結(jié)果顯示DEPDC1在HepG2細胞中的表達明顯高于SK-hep1，SMMC7721，BEL7402，QGY77

5、01細胞。
　?。?）對干擾多肽組和對照多肽組的時間梯度及濃度梯度的MTT實驗檢測，顯示出干擾多肽抑制 HepG2細胞生長，且3uM為干擾多肽藥物的最佳作用濃度。
　?。?）在顯微鏡下觀察干擾多肽處理的HepG2細胞結(jié)果顯示：細胞數(shù)量明顯較對照多肽組低，細胞形態(tài)明顯改變，生長抑制。
　?。?）經(jīng)過干擾多肽組和對照多肽組處理的HepG2細胞，經(jīng)過Tunel染色法檢測，發(fā)現(xiàn)干擾多肽組HepG2細胞的陽性率明顯高于對照多肽組

6、，細胞生長受抑制，凋亡明顯增加。
　?。?）在干擾多肽處理的HepG2細胞，在3h-6h-12h-24h提取蛋白運用Western blot技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)：casepase-3的表達較對照多肽組減少，而cleaved casepase-3的表達較對照多肽增加。
　　（6）在干擾多肽和對照多肽處理HepG2細胞后，在1h、6h及12h時運用免疫熒光染色及DAPI細胞核染色，在熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：干擾多肽組干預(yù)的HepG2細胞,

7、隨著時間的增加，細胞核內(nèi)分布的NF-κB減少。
　　（7）運用Western blot檢測，發(fā)現(xiàn)干擾多肽組的DEPDC1表達量明顯較對照多肽組低，提示DEPDC1的表達可能受DEPDC1-ZNF224的調(diào)控。
　　結(jié)論：
　　DEPDC1在多種肝癌細胞系中表達明顯上調(diào)。DEPDC1在HepG2中的作用是通過NF-κB信號通路抑制細胞凋亡而促進細胞增殖，從而有利于肝癌發(fā)生。DEPDC1-ZNF224可能是肝癌的潛在治療靶