蛋白酪氨酸磷酸酶-PEST促進(jìn)HepG2肝癌細(xì)胞增殖作用的研究.pdf

1、目的:本研究通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)建立PTP-PEST穩(wěn)定高表達(dá)的HepG2細(xì)胞株,利用RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、蛋白免疫印跡技術(shù)對(duì)穩(wěn)定高表達(dá)PTP-PEST的HepG2細(xì)胞內(nèi)相關(guān)基因和蛋白進(jìn)行分析,MTT法觀測(cè)不同HepG2細(xì)胞株的增殖速率,初步探討PTP-PEST對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響以及可能涉及的信號(hào)傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)。
　　 方法:
　　 1.構(gòu)建PTP-PEST真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1/PTP-PEST,并和空載體

2、pcDNA3.1分別轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,G418篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆。
　　 2.用RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè)PTP-PEST的mRNA含量,Western Blot篩選PTP-PEST蛋白表達(dá)改變的穩(wěn)定細(xì)胞轉(zhuǎn)染株。
　　 3.應(yīng)用Real-time PCR、Western Blot及MTT法觀察高表達(dá)PTP-PEST對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)相關(guān)基因表達(dá)量的影響以及HepG2細(xì)胞體外增殖能力的改變。
　　 結(jié)果:

3、
　　 1.RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,PTP-PEST穩(wěn)定高表達(dá)的HepG2肝癌細(xì)胞株已經(jīng)建立。
　　 2.PTP-PEST對(duì)HepG2肝癌細(xì)胞的影訂向:@PTP-PEST使細(xì)胞增殖速度加快；②PTP-PEST促進(jìn)了細(xì)胞內(nèi)Ras、Grb2和PSTPIP基因水平的上調(diào),并在蛋白水平驗(yàn)證了Grb2表達(dá)升高。
　　 結(jié)論:
　　 1.成功構(gòu)建PTP-PEST高表達(dá)H