血管生成在肝細(xì)胞肝癌發(fā)生及發(fā)展中的作用研究.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文血管生成在肝細(xì)胞肝癌發(fā)生及發(fā)展中的作用研究姓名：趙文博申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（血液病）指導(dǎo)教師：王欣20080420山東大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié)果：1 ．H E 染色結(jié)果顯示H C C 癌組織及正常對(duì)照肝組織呈典型的組織病理學(xué)改變；l ％瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示抽提的組織總R N A 的質(zhì)量高，無(wú)降解現(xiàn)象。芯片掃描結(jié)果發(fā)現(xiàn)2張芯片中共同差異表達(dá)基因8 5 5 個(gè)，其中上調(diào)的基因?yàn)? 5 7 個(gè)，下調(diào)的基因?yàn)? 9 8

2、 個(gè)。C l u s t e r 聚類分析表明H C C 的發(fā)生發(fā)展過(guò)程相當(dāng)復(fù)雜，其中涉及癌基因與抑癌基因、編碼細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的基因、與細(xì)胞應(yīng)激相關(guān)的基因、細(xì)胞骨架和運(yùn)動(dòng)相關(guān)的基因、細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因、調(diào)節(jié)D N A 合成、修復(fù)和重排相關(guān)的基因、細(xì)胞因子受體相關(guān)基因、免疫蛋白相關(guān)基因、細(xì)胞代謝相關(guān)基因、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因、調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的基因、與生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)的基因等多個(gè)通路的多條基因，尚有部分基因不能分類。2 ．P R L ．3 在H C C

3、 組織中表達(dá)明顯升高，同癌旁組織相比差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組化染色顯示，P R L - 3 主要定位于細(xì)胞漿。與患者臨床資料進(jìn)行相關(guān)分析顯示，H C C組織中P R L - 3 的m R N A 水平與血清A F P 水平、腫瘤血管侵襲和腫瘤轉(zhuǎn)移狀況呈正相關(guān)。P R L ．3 與C D 3 1 染色標(biāo)記的微血管密度( M V D ) 呈正相關(guān)( F 0 ．5 8 3 ，P < o ．0 0 1 ) 通過(guò)檢測(cè)M M P - 2

4、、M M P ．9 和E - c a d h e r i n 在H C C 組織中m R N A 和蛋白水平的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，P R L ．3 與M M P ．2 儼0 ．6 9 5 ，P < o ．0 0 1 ) 、M M P - 9 ( F0 ．5 5 4 ，P < o ．0 0 1 ) 表達(dá)呈正相關(guān)，和E - c a d h e r i n( 盧．0 ．7 3 1 ，P < 0 ．0 0 0 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。3 ．用免疫

5、磁珠分選獲得血管內(nèi)皮細(xì)胞的純度在9 0 ％以上。從H C C 組織中分離的血管內(nèi)皮細(xì)胞呈現(xiàn)典型的內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)特征，免疫細(xì)胞化學(xué)和熒光染色證實(shí)此內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)v W F ，在半定量R T - P C R 檢測(cè)中該細(xì)胞表達(dá)C D 3 1 ，C D l 4 6 ，而不表達(dá)A F P 及C D 4 5 。在H C C 血管內(nèi)皮細(xì)胞中P R L ．3 、M M P ．2 、M M P ．9 在m R N A 水平和蛋白水平的表達(dá)均明顯升高。結(jié)論

6、：．1 ．本研究利用人類全基因組芯片技術(shù)對(duì)H C C 腫瘤組織與正常對(duì)照肝組織進(jìn)行了差異表達(dá)基因的篩選和綜合分析，發(fā)現(xiàn)了在H C C 發(fā)生發(fā)展中的多個(gè)差異表達(dá)基因，其中許多基因?qū) C C 的分子機(jī)制研究有較大的價(jià)值。2 ．在組織學(xué)水平的檢測(cè)中，P R L ．3 與M M P - 2 、M M P ．9 顯著高表達(dá)，E - c a d h e r i n 表達(dá)顯著降低，并且P R L ．3 與M V D 、M M P ．2 、M M P