缺氧及TGF-β1誘導(dǎo)的PLOD2介導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及黏著斑形成促進(jìn)宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、背景：腫瘤缺氧及細(xì)胞間質(zhì)內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子1(Transforming Growth Factor-β1，TGF-β1)的表達(dá)升高是惡性腫瘤的常見特征，二者均可促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生。腫瘤轉(zhuǎn)移是包括宮頸癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤患者死亡的首要原因。已有研究表明PLOD2基因編碼的賴氨酸羥化酶Ⅱ(LH2)在低氧環(huán)境和TGF-β1的刺激下表達(dá)升高，且在乳腺癌、肺癌、肉瘤、宮頸癌等多種腫瘤中高表達(dá)，其高表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后密切相關(guān)。
　　目的：本

2、次研究的主要目的是通過體外實(shí)驗(yàn)分析PLOD2基因?qū)m頸癌細(xì)胞株遷移侵襲能力的影響及其分子機(jī)制，并通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證PLOD2基因?qū)m頸癌轉(zhuǎn)移的促進(jìn)作用。研究的意義是為宮頸癌的侵襲轉(zhuǎn)移分子機(jī)制研究提供新的信息，為預(yù)后分析和分子治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法：使用siRNA轉(zhuǎn)染技術(shù)靶向敲除宮頸癌HeLa細(xì)胞和SiHa細(xì)胞的PLOD2基因，通過Transwell實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、基質(zhì)膠Transwell實(shí)驗(yàn)、黏附實(shí)驗(yàn)等分析PLOD2對(duì)細(xì)

3、胞遷移、侵襲、粘附能力的影響;采用熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)、Western blot實(shí)驗(yàn)、免疫熒光實(shí)驗(yàn)分析基因的表達(dá)變化;通過鬼筆環(huán)肽染色等觀察細(xì)胞形態(tài)的變化;宮頸癌患者PLOD2基因的表達(dá)分析及預(yù)后分析通過數(shù)據(jù)庫Oncomine及TCGA獲得。最后，采用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建穩(wěn)定穩(wěn)定沉默PLOD2基因的HeLa細(xì)胞株，通過尾靜脈注射穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建動(dòng)物轉(zhuǎn)移模型，并進(jìn)行小動(dòng)物活體實(shí)驗(yàn)觀察PLOD2基因?qū)m頸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響。
　　結(jié)果：低氧環(huán)

4、境及TGF-β1的刺激均可誘導(dǎo)宮頸癌HeLa細(xì)胞和SiHa細(xì)胞PLOD2基因的表達(dá)升高;通過siRNA技術(shù)靶向沉默PLOD2可降低細(xì)胞的遷移、侵襲和粘附能力，并抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生以及黏著斑的形成;此外，PLOD2的敲除還可以抑制缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移侵襲能力的提高;還可以通過抑制β-catenin的核轉(zhuǎn)位及AKT的磷酸化，阻遏TGF-β1誘導(dǎo)的EMT樣細(xì)胞表型改變。最后，數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果表明PLOD2基因在宮頸癌患者中高表達(dá)且提