異甘草素通過(guò)促進(jìn)Nrf2抗氧化途徑抑制ROS和（或）NF-κB介導(dǎo)的NLRP3炎癥小體活化減輕實(shí)驗(yàn)性腦出血后早期腦損傷.pdf

1、腦出血（Intracerebral hemorrhage，ICH）后可誘導(dǎo)強(qiáng)烈的氧化應(yīng)激(Oxidativestress，OS)應(yīng)答、炎癥過(guò)程及大量白的細(xì)胞浸潤(rùn)，從而造成嚴(yán)重的血腦屏障破壞、腦水腫及神經(jīng)細(xì)胞死亡等。這些腦損害與腦出血后患者神經(jīng)功能惡化和預(yù)后密切相關(guān)。然而，目前對(duì)于腦出血后腦組織損傷的治療，尚無(wú)特效方法。異甘草素(Isoliquiritigenin，ILG)被報(bào)道具有多種生物學(xué)功能，包括能激活核因子E-2相關(guān)因子2(Nuc

2、lear factor erythroid-2related factor2，Nrf2)介導(dǎo)的抗氧化系統(tǒng)，負(fù)性調(diào)控核因子κB(Nuclear factor-kappa B，NF-κB)和Nod樣受體家族熱蛋白結(jié)構(gòu)域3(Nod-like receptor family-pyrin domain-containing3，NLRP3)炎癥小體途徑等。但是，其在腦出血后早期腦損傷中的作用及作用相關(guān)的分子機(jī)制目前仍不清楚。腦出血后，Nrf2活化所

3、誘導(dǎo)的抗氧化系統(tǒng)具有腦保護(hù)作用，NLRP3炎癥小體途徑活化則加重腦損傷，然而兩者在腦出血后早期腦損傷中的相互作用關(guān)系仍有待闡明。
　　研究目的:
　　1.探索ILG在腦出血后早期腦損傷中的作用及相關(guān)分子機(jī)制;2.探究在腦出血后早期腦損傷中，Nrf2活化所誘導(dǎo)的抗氧化系統(tǒng)與NLRP3炎癥小體途徑活化之間的關(guān)系。
　　研究方法:
　　建造無(wú)菌膠原酶Ⅳ誘導(dǎo)的大鼠腦出血模型及相應(yīng)的假手術(shù)模型。模型建造前24h，大鼠右側(cè)腦

4、室內(nèi)注入Nrf2small interfering RNA(siRNA)。模型建造后30min、12h、24h、48h，大鼠腹腔內(nèi)注射不同劑量ILG（10、20或40mg/kg）。模型建造后24h或72h取腦組織進(jìn)行相應(yīng)評(píng)分、檢測(cè)和分析:行為學(xué)缺損[改良的神經(jīng)功能缺損評(píng)分(Modified Neurological Severity Score，mNSS)]、組織學(xué)損害[蘇木素&伊紅染色(Hematoxylin&eosin staini

5、ng，H&E staining)]、腦水腫[腦水容量(Brain water content，BWC)干/濕重法）]、血腦屏障(Brain-bloodbarrier，BBB)破壞[伊文思藍(lán)(Evans blue，EB)染料滲透法]、神經(jīng)元狀態(tài)惡化[FJC染色(Fluoro-jade(@)C staining，F(xiàn)JC staining)]、實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative real-time RT PCR，qRT-P

6、CR)，蛋白質(zhì)印跡(Western blot，WB)，免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）/免疫熒光(Immunofluorescence，IF)染色，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)。使用相應(yīng)試劑盒檢測(cè)分析血腫周圍腦組織中還原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(Glutathione/Oxidized glutathione，GSH/GSSG)含量、活性

7、氧族(Reactive oxygenspecies，ROS)含量、過(guò)氧化氫酶(Catalase，CAT)活性及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)活性。
　　研究結(jié)果:
　　1.ILG20mg/kg和40mg/kg腹腔內(nèi)注射給藥顯著減輕腦出血后早期腦損傷（行為學(xué)缺損、組織學(xué)損害、血腦屏障破壞、腦水腫、神經(jīng)元惡化），但兩者的腦保護(hù)作用程度無(wú)明顯差異。選擇20mg/kg為后續(xù)實(shí)驗(yàn)ILG的給藥劑量;<

8、br>　　2.ILG20mg/kg給藥后活化Nrf2介導(dǎo)的抗氧化系統(tǒng)，抑制NF-κB和NLRP3炎癥小體途徑活化，抑制ROS產(chǎn)生;
　　3.Nrf2siRNA沉默Nrf2基因后，腦出血誘導(dǎo)的早期腦損傷加重（行為學(xué)缺損、腦水腫、神經(jīng)元惡化）和NF-κB p65、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白表達(dá)增加。ILG給藥后減輕上述損傷的加重和蛋白表達(dá)的上調(diào)。
　　研究結(jié)論:
　　1.ILG能夠顯著改善腦出血