DNMT1對目的基因mRNA表達(dá)水平影響的初步研究.pdf

1、目的：在HPV相關(guān)腫瘤中，高危型HPV感染，是受染細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的必要條件。超過一半的HPV相關(guān)腫瘤與HPV16相關(guān)。本課題組前期試驗證明人類乳頭瘤病毒HPV16E6、E7與DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)相關(guān)，引起6種抑癌基因（SPARC、TFPI2、RRAD、SFRP1、MT1G和NMES1）甲基化發(fā)生相應(yīng)的改變，進(jìn)而引起基因表達(dá)改變，最終可能參與細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化過程。DNMTs主要包括DNMT1和DNMT3，前者主要參與甲基化狀態(tài)的

2、維持，也是非CpG位點從頭甲基化所必需，并與甲基化狀態(tài)的延伸有關(guān);后者包括DNMT3a、DNMT3b和DNMT3L。DNMT3a和3b是主要的從頭甲基化酶。人們認(rèn)為DNMT3L不直接參與DNA甲基化，但其與DNMT3a和3b相互作用，可能在轉(zhuǎn)錄抑制中發(fā)揮作用。
　　前期研究中發(fā)現(xiàn)，將SiHa細(xì)胞株（HPV16陽性）中的E6、E7基因分別沉默后，4種DNMTs的表達(dá)水平均有所下降，但下降程度存在明顯差異。而將HPV16E6、E7同時

3、轉(zhuǎn)入原代角質(zhì)形成細(xì)胞后，在細(xì)胞永生化的過程中，4種DNMTs的表達(dá)水平也存在不同程度的升高。據(jù)此假設(shè)，除了傳統(tǒng)認(rèn)為的不同功能之外，DNMTs在調(diào)控目的基因的甲基化狀態(tài)時，可能有（相對）關(guān)鍵的DNMT存在。
　　本研究擬采用SiHa細(xì)胞，應(yīng)用特異性siRNA沉默DNMT1，觀察DNMT1和6種抑癌基因的mRNA表達(dá)水平以及DNMT1蛋白表達(dá)水平的變化。
　　方法：應(yīng)用針對DNMT1的siRNA，沉默DNMT1。應(yīng)用qPCR比較