Wnt-β-catenin信號(hào)通路調(diào)控皮膚成纖維細(xì)胞中FGF信號(hào)反饋激活的機(jī)制研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　本研究旨在探討bFGF調(diào)控的基因庫并且進(jìn)一步確定在人成纖維細(xì)胞中參與細(xì)胞遷移的靶分子。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　我們采用RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)鑒定出在bFGF處理后，有顯著性差異的基因和許多信號(hào)通路，并且采用qRT-PCR進(jìn)一步驗(yàn)證。之后，我們采用Westernblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)受bFGF和Wnt通路調(diào)控的關(guān)鍵蛋白，用大鼠皮膚創(chuàng)傷模型檢測(cè)Wnt信號(hào)通路在皮膚愈合中所起的作用。運(yùn)用小干擾RNA實(shí)驗(yàn)抑制內(nèi)源性

2、的β-catenin，同時(shí)進(jìn)一步采用RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)鑒定出在β-catenin干擾后，總的轉(zhuǎn)錄組的變化情況。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　RNA測(cè)序?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示在bFGF處理后，Wnt信號(hào)通路的基因發(fā)生了改變，包括Wnt2b，Wnt3，Wnt11，T-cell factor7(TCF7)和Frizzled8(FZD8)。并且，在LiCl(Wnt通路激活劑)與IWR-1(Wnt通路抑制劑)處理后，前者能促進(jìn)成纖維細(xì)胞的遷移速

3、率，而后者相反。此外，在bFGF處理后，GSK3β在ser9位點(diǎn)的磷酸化和核內(nèi)的β-catenin均能上升。分子和生化實(shí)驗(yàn)提示PI3K信號(hào)能通過JNK激活GSK3β/β-catenin/Wnt信號(hào)通路，說明PI3K和JNK處于β-catenin的上游。β-catenin干擾后，細(xì)胞遷移速率降低。此外，RNA-Seq轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)鑒定出β-catenin干擾后bFGF和FGF21的表達(dá)也下降。并且，Western blot實(shí)驗(yàn)表明FGF21