表兒茶素對大鼠腦出血的保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、背景與目的：
　　腦出血（intracerebral hemorrhage，ICH）是一類發(fā)病率和死亡率均較高的疾病。腦出血發(fā)生后，除機(jī)械性創(chuàng)傷外，炎癥、水腫等繼發(fā)性損傷，在腦出血的預(yù)后中占有重要地位，是腦出血后致殘致死的重要原因。腦出血事發(fā)突然，進(jìn)展迅速，雖然發(fā)病率低于腦梗死，但致死致殘率較高，積極尋找腦出血有效的治療方法具有重要意義。
　　多酚類物質(zhì)是廣泛存在于可可、綠茶、葡萄、紅酒中的天然化合物，有包括黃酮類在內(nèi)的幾種

2、不同的類型。研究表明，長期食用含有多酚類物質(zhì)的人群心血管疾病發(fā)生率低，從而對于多酚類物質(zhì)的研究進(jìn)入眾多專家、學(xué)者的視線。在神經(jīng)系統(tǒng)方面，黃酮類不僅具有抗氧化、螯合鐵離子的作用，還具有降低神經(jīng)元脆性、增加殘存神經(jīng)元功能、誘導(dǎo)神經(jīng)元再生等作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，口服富含黃酮類物質(zhì)能夠抑制淀粉樣蛋白（amyloid beta，Aβ）的聚集，增強(qiáng)機(jī)體對其清除能力，從而改善認(rèn)知功能。在眾多多酚類物質(zhì)中，單體類黃烷醇—表兒茶素（(―)-epicat

3、echin，EC），主要存在于可可、綠茶中，最容易透過血腦屏障。研究表明，表兒茶素在小鼠腦梗死或腦出血后可通過Nrf2通路，減輕氧化應(yīng)激損傷，保護(hù)腦組織。但EC是否能在腦出血大鼠身上發(fā)揮同樣的保護(hù)作用，以及除了抗氧化、抗自由損傷外是否還有其他方面的作用，尚未見報(bào)道。
　　基于上述研究背景，我們設(shè)計(jì)了該實(shí)驗(yàn)，旨在研究表兒茶素對腦出血后血腫體積、腦水腫、炎癥反應(yīng)及腦白質(zhì)損傷等方面的影響，探索其在腦出血方面的應(yīng)用價(jià)值，積極尋找腦出血有效

4、的治療辦法，為腦出血的治療提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　將成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)分為空白對照組（sham組）、手術(shù)組（Vehicle-ICH組）和藥物處理組（EC-ICH組）。EC-ICH組預(yù)先用表兒茶素45mg/（kg?d）連續(xù)灌胃7d，然后與Vehicle-ICH組一起采用膠原酶法制備大鼠腦出血模型，sham組在同一位置注射等量生理鹽水。在腦出血后1d對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分，評(píng)分為零，

5、或者意識(shí)不清、昏迷大鼠認(rèn)為造模不合格，棄之不用，由重新成功造模大鼠進(jìn)行填補(bǔ)，并對合格大鼠造模后的1d，3d，7d，14d進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分；在造模后1d，3d，7d對大鼠進(jìn)行磁共振檢查，觀察并記錄血腫體積及血腫周圍組織水腫程度；在造模后28d觀察并記錄大鼠腦白質(zhì)損傷情況；在造模后4h，1d，3d通過免疫熒光技術(shù)檢測兩種小膠質(zhì)細(xì)胞（M1,M2）的數(shù)量變化情況；在造模后1d，3d通過伊文思藍(lán)染色法及免疫熒光檢測白蛋白法檢測血腦屏障通透性變

6、化情況；在造模后1d，3d，7d用qRT-PCR技術(shù)檢測IL-4，IL-1β，IL-10，IL-6，TNF-α，TGF-β等炎癥因子的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1、EC-ICH組神經(jīng)功能缺損評(píng)分明顯小于Vehicle-ICH組，神經(jīng)功能恢復(fù)較快。
　　2、EC-ICH1d組血腫體積（27.51±2.29mm3）明顯小于Vehicle-ICH1d組（44.49±1.78mm3），EC-ICH3d組血腫體積（17.58±

7、1.99 mm3）明顯小于Vehicle-ICH3d組（29.35±2.29mm3），P均＜0.05。
　　3、伊文思藍(lán)染色結(jié)果表明，3d時(shí)EC-ICH組腦組織中伊文思藍(lán)明顯少于Vehicle-ICH組；同樣，用免疫熒光法檢測白蛋白，EC-ICH組腦組織中白蛋白含量明顯小于Vehicle-ICH組，P＜0.05。
　　4、腦出血發(fā)生后4h即已檢測到極化狀態(tài)的小膠質(zhì)細(xì)胞M1,M2。M1在腦出血后1d開始升高，3d達(dá)高峰，M2在

8、腦出血4h時(shí)短暫升高；大鼠腦出血前預(yù)先應(yīng)用EC后，EC-ICH組M1數(shù)量在4d、1d、3d時(shí)均少于Vehicle-ICH組（P＜0.05）；而4h時(shí)EC-ICH組M2數(shù)量高于Vehicle-ICH組（P＜0.05）。
　　5、qRT-PCR結(jié)果顯示，IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表達(dá)量明顯降低，IL-4、IL-10、TGF-βmRNA表達(dá)量等炎癥因子明顯升高。
　　6、腦白質(zhì)損傷結(jié)果顯示，腦出血后28d EC-IC

9、H組腦白質(zhì)明顯恢復(fù)。
　　結(jié)論：
　　1、表兒茶素預(yù)應(yīng)用能夠抑制早期血腫的擴(kuò)大，改善大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀；
　　2、表兒茶素預(yù)應(yīng)用能夠減輕腦出血后血腦屏障的破壞，降低腦組織水腫程度；
　　3、表兒茶素預(yù)應(yīng)用能夠抑制腦出血后早期小膠質(zhì)細(xì)胞向M1型極化，促進(jìn)其向
　　M2型極化；
　　4、表兒茶素預(yù)應(yīng)用能夠下調(diào)IL-1β，TNF-α，IL-6等炎癥因子的表達(dá)，上調(diào)IL-4， IL-10，TGF-β等炎癥因