Necrostatin-1在小鼠腦出血中的作用及相關(guān)機(jī)制研究.pdf

1、目的：在小鼠腦出血模型中,研究程序性壞死的特異性抑制劑necrostatin-1對(duì)腦出血引起的大腦損傷作用,探討 necrostatin-1對(duì)另外兩種程序性細(xì)胞死亡方式(凋亡和自噬性細(xì)胞死亡)的影響。
　　方法：采用膠原酶IV注入雄性ICR小鼠左側(cè)紋狀體建立腦出血(intracerebral hemorrhage, ICH)模型。在術(shù)前15 min分別通過單側(cè)側(cè)腦室給藥,并在傷后不同時(shí)間處死。首先利用組織缺損體積(lesion v

2、olume, LV)的方法評(píng)估necrostatin-1對(duì)ICH后組織損傷的作用;為了進(jìn)一步驗(yàn)證腦組織的損傷是否與細(xì)胞損傷數(shù)相關(guān),我們采用體視學(xué)顯微鏡觀察并計(jì)數(shù)各組出血中心區(qū)以及周邊區(qū)PI陽性細(xì)胞數(shù)。為了進(jìn)一步探究necrostatin-1是否對(duì)其他兩種程序性死亡方式(凋亡和自噬性細(xì)胞死亡)有影響,我們利用免疫印記法分別檢測(cè)了凋亡活性相關(guān)蛋白(Bcl-2,cleaved caspase-3)和自噬活性相關(guān)蛋白(Beclin-1,LC3-

3、II,p62)的表達(dá)水平。此外,為了進(jìn)一步驗(yàn)證 necrostatin-1對(duì)ICH后凋亡和自噬活性的影響,我們也聯(lián)合利用凋亡的抑制劑zVAD及自噬抑制劑3-MA,檢測(cè)了cleaved caspase-3和LC3-II的表達(dá)。
　　結(jié)果：Necrostatin-1能夠減少ICH引起的組織損傷體積和PI陽性細(xì)胞數(shù);免疫印跡結(jié)果顯示necrostatin-1能夠降低ICH后自噬和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)或活性。3-MA可以同時(shí)降低ICH后LC