表兒茶素對小鼠卵母細胞成熟質(zhì)量的影響.pdf

1、本研究以小鼠為模型，通過探討卵母細胞線粒體DNA（mitochondrialDNA，mtDNA）拷貝數(shù)的變化以及卵巢抗氧化能力的強弱等，研究表兒茶素（Epicatechin，EC）對體外成熟（Matured in vitro，IVM）卵母細胞以及經(jīng)重復(fù)超數(shù)排卵體內(nèi)成熟卵母細胞成熟質(zhì)量的影響，并進一步闡明線粒體DNA與卵母細胞發(fā)育潛能之間的關(guān)系，以及EC影響卵母細胞成熟的作用機制。
　　首先，探討了表兒茶素對體外成熟小鼠卵母細胞mt

2、DNA拷貝數(shù)和發(fā)育潛能的影響。小鼠卵丘-卵母細胞復(fù)合體（Cumulus-Oocyte Complexs，COCs）分別在添加不同濃度EC（0μmol/L，5μmol/L，10μmol/L，15μmol/L和20μmol/L）的成熟培養(yǎng)液中體外成熟培養(yǎng)16h后，添加EC各處理組的卵母細胞mtDNA拷貝數(shù)均有所增加，其中，10μmol/L組和15μmol/L組的mtDNA拷貝數(shù)均顯著高于空白對照組（分別為618223±220584，7778

3、51±120487，對照組為304380±60963，P＜0.05）;但10μmol/L組mtDNA拷貝數(shù)更接近自然排卵周期卵子的mtDNA含量（618223±220584 vs587688±204035，P＞0.05）。體外成熟培養(yǎng)及孤雌激活的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn):成熟液中添加10μmol/L EC組的卵母細胞第一極體排出率與對照組相比差異不顯著（P＞0.05），但能顯著提高卵母細胞孤雌激活后胚胎的囊胚發(fā)育率（55.71％±2.84％ vs4

4、8.04％±3.54％,P＜0.05）。
　　其次，探索表兒茶素處理小鼠的用藥方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射EC組（495758±76910）和灌胃EC組（523196±89292）小鼠卵母細胞的mtDNA拷貝數(shù)差異不顯著（P＞0.05）;而與各自的空載對照組相比mtDNA拷貝數(shù)均顯著增加（495758±76910 vs281266±42266，523196±89292 vs275836±33959，P＞0.05）;注射EC組卵巢組織P

5、GC-1α和Tfam基因的表達量與空載對照組相比均上調(diào)，且差異顯著（P＜0.05）;注射EC2d組（489723±148982）和注射EC7d組（495758±203486）的mtDNA拷貝數(shù)差異不顯著（P＞0.05），且均顯著高于對照組（285786±99988，P＜0.05）;超排期間注射EC組與對照組相比，獲卵數(shù)沒有顯著差異（22.80±5.84 vs21.35±5.12，P＞0.05）。
　　最后，探討了超排期間注射表兒茶

6、素對重復(fù)超排小鼠卵母細胞發(fā)育潛能的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著超排次數(shù)的增加，對照組獲得的2-cell胚胎數(shù)顯著減少，而EC處理組沒有顯著變化，并均與超排1次對照組獲取的胚胎數(shù)差異不顯著（20.25±1.06 vs19.25±1.95 vs20.33±1.61 vs21.00±0.71，P＞0.05）;胚胎進行體外培養(yǎng)后，發(fā)育到囊胚的比率和孵化囊胚率隨著超排次數(shù)的增加呈現(xiàn)出逐漸下降的趨勢，對照組的孵化囊胚率顯著下降（超排1次為62.65±0.2

7、1;超排3次為53.52±3.13;超排5次為42.81±4.83，P＜0.05），但EC處理組孵化囊胚率和總囊胚率下降幅度相對較小;當(dāng)超排次數(shù)增加至5次后，EC組和對照組的囊胚細胞凋亡率均顯著增加（P＜0.05），對照組的細胞凋亡率顯著大于EC組（3.74±0.86 vs3.10±0.74，P＜0.05）。熒光定量分析結(jié)果顯示:超排1次時，EC處理組2-cell胚胎mtDNA拷貝數(shù)顯著高于對照組（489723±148982 vs298

8、333±139487，P＜0.05），然而連續(xù)超排3次和5次后，EC組與對照組的mtDNA拷貝數(shù)均大幅度增加，且各組間的差異不顯著（769066±389862 vs811676±473759 vs743958±224432 vs771691±341214，P＞0.05）;與超排5次對照組相比，超排5次EC組小鼠卵巢組織GPX1、PRDX3、SOD和GLS2四種抗氧化酶基因表達均顯著上調(diào)，卵巢GSH含量顯著提高（46.68±2.67 vs

9、37.74±3.80，P＜0.05）。
　　以上結(jié)果表明:（1）體外成熟液中添加適宜濃度（10μmol/L）的EC可提高小鼠卵母細胞的mtDNA拷貝數(shù)及其發(fā)育潛能;（2）通過灌胃和注射方法補充純EC，均可以促進小鼠卵母細胞mtDNA拷貝數(shù)增多;（3）小鼠超排期間注射一定劑量（10 mg/kg體重）的EC可使卵母細胞的mtDNA拷貝數(shù)增多，但不影響獲卵數(shù);（4）隨著連續(xù)超排次數(shù)的增加，獲得的胚胎數(shù)目減少、質(zhì)量下降;然而，超排期間注射