阿魏酸鈉抗大鼠心肌肥大作用研究.pdf

1、目的：通過建立腹主動脈縮窄左室心肌肥厚大鼠模型及Ang II誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞肥大模型，從在體與離體水平觀察阿魏酸鈉（Sodium Ferulate, SF）抗心肌肥大效應(yīng)及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：采用腹主動脈縮窄（abdominal aortic constriction, AAC）法制備大鼠左室肥厚模型。實驗動物隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組和SF低（20 mg/kg/d）、中（40mg/kg/d）、高（80mg/kg/d）組

2、。連續(xù)給藥25天后檢測大鼠血流動力學(xué)指標(biāo)，計算左心室重量指數(shù)，病理學(xué)方法觀察大鼠心肌病理形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)改變，放射免疫法測定大鼠心肌組織中血管緊張素II（AngII）及內(nèi)皮素-1（ET-1）含量，實時熒光定量PCR（Real time PCR）法檢測心房利鈉因子（atrial natriuretic factor, ANF）、β-肌球蛋白重鏈（β-myosin heavy chain,β-MHC）、PKC-β、Raf-1、ERK1/2及M

3、KP-1 mRNA表達(dá)；蛋白質(zhì)免疫印跡（Western blotting）檢測PKC-β、Raf-1、p-ERK1/2及MKP-1蛋白質(zhì)表達(dá)。采用0.1μmol·L-1血管緊張素II（AngII）誘導(dǎo)離體培養(yǎng)的大鼠乳鼠心肌細(xì)胞肥大模型。采用MTT法檢測細(xì)胞活性，明確給藥劑量；實驗隨機(jī)分為9組：正常組、正常給藥組、模型組、SF低（50μmol?L-1）、中（100μmol·L-1）、高（200μmol·L-1）組；為觀察SF抗心肌細(xì)胞肥大

4、的作用是否與NO釋放有關(guān)，同時設(shè)置了NO的前體物質(zhì)L-精氨酸（L-arg）組、L-arg+NO合酶抑制劑NG-硝基-L-精氨酸-甲酯（L-NAME）組及SF-H+L-NAME組。以心肌細(xì)胞直徑、細(xì)胞蛋白質(zhì)含量、ANF和β-MHC mRNA表達(dá)為心肌肥大的標(biāo)志， HE染色觀察細(xì)胞肥大情況；通過試劑盒檢測細(xì)胞上清液中NO水平、NOS與eNOS活性、cGMP及cAMP含量、eNOS、PKC-β、Raf-1、ERK1/2及MKP-1 mRNA及

5、蛋白表達(dá)，進(jìn)一步明確SF抗心肌肥大的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：⑴經(jīng)制模各組大鼠血壓（BP）和左室內(nèi)壓（LVSP）明顯高于假手術(shù)組，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠左心室肥厚指數(shù)LVHI和MD均明顯升高，心肌組織形態(tài)學(xué)和超微結(jié)構(gòu)受損明顯，反映心臟舒縮活動的指標(biāo)LVEDP及±dp/dtmax明顯異常，心肌肥大標(biāo)志性基因ANF及β-MHC mRNA表達(dá)顯著上調(diào)。與模型組比較，SF給藥組使LVHI和MD趨于下降或明顯降低，左室心肌形態(tài)學(xué)、超微結(jié)構(gòu)及

6、左室舒縮功能不同程度改善，ANF及β-MHC mRNA表達(dá)也呈趨于下調(diào)或顯著下調(diào)。⑵模型組大鼠心肌組織中AngII和ET-1含量顯著升高，同時PKC-β、Raf-1和ERK1/2 mRNA及蛋白表達(dá)明顯上調(diào)，而MKP-1 mRNA及蛋白表達(dá)顯著下調(diào)。而SF給藥組可不同程度降低心肌組織中AngII和ET-1的含量，同時下調(diào)PKC-β、Raf-1和ERK1/2 mRNA及蛋白表達(dá)，上調(diào)MKP-1 mRNA及蛋白的表達(dá)。⑶SF（50,100,

7、200μmol·L-1）對離體培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞無明顯毒副作用。且0.1μmol?L-1 Ang II能夠顯著誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大，使心肌細(xì)胞直徑及蛋白含量增加，ANF和β-MHC mRNA表達(dá)上調(diào)。SF給藥各組及陽性藥L-精氨酸（L-arg,1000μmol?L-1）組可不同程度改善心肌細(xì)胞肥大的各項效應(yīng)指標(biāo)，且其抑制心肌細(xì)胞肥大的效應(yīng)可被L-NAME取消。⑷與正常組比較，0.1μmol?L-1 Ang II可誘導(dǎo)培養(yǎng)的心肌細(xì)胞上清液NO

8、含量、NOS及eNOS活性降低、心肌細(xì)胞中cGMP含量降低，cAMP含量升高，同時存在心肌細(xì)胞PKC-β、Raf-1、ERK1/2表達(dá)上調(diào)，MKP-1及eNOS表達(dá)下調(diào)。而SF高劑量及L-arg給藥組可明顯升高NO含量、NOS及eNOS活性、心細(xì)胞肌中cGMP含量，降低cAMP含量，下調(diào)PKC-β、Raf-1、ERK1/2表達(dá)而上調(diào)MKP-1及eNOS表達(dá)。
　　結(jié)論：SF可抑制AAC術(shù)所致的大鼠左心室肥厚及Ang II誘導(dǎo)的心肌