促紅細(xì)胞生成素對(duì)玻璃體腔注射神經(jīng)酰胺誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜損傷的保護(hù)作用及機(jī)理.pdf

1、目的：探討重組人促紅細(xì)胞生成素（EPO）對(duì)玻璃體腔注射神經(jīng)酰胺誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜視神經(jīng)損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法：SD大鼠隨機(jī)分為4組（6只/組）：即正常對(duì)照組、DMSO處理組、神經(jīng)酰胺2(C2)處理組和 C2+EPO（Erythropoietin，人促紅細(xì)胞生成素）治療組。通過玻璃體腔注射C2來誘導(dǎo)視網(wǎng)膜損傷，并且檢測(cè)玻璃體腔注射EPO對(duì)C2誘導(dǎo)視網(wǎng)膜損傷的保護(hù)作用。在C2+EPO治療組，SD大鼠C2玻璃體腔給藥三天后再通過

2、眼內(nèi)注射 EPO進(jìn)行治療。使用閃光視網(wǎng)膜電圖（f–ERG）來檢測(cè)經(jīng)不同處理大鼠的視網(wǎng)膜功能、TUNEL法檢測(cè)視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡、TEER(Trans–endothelial Electrical Resistance)檢測(cè)人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞（Human retinal microvascular endothelial cells，HRMECs）的跨內(nèi)皮電阻。并且采用免疫熒光和Q–PCR來檢測(cè)GFAP（Glial fibrillary

3、acidic protein，神經(jīng)膠質(zhì)酸性蛋白）和血–視網(wǎng)膜屏障（blood–retinal barrier，BRB）相關(guān)因子在R28細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄水平（mRNA）的改變。
　　結(jié)果：相比于正常對(duì)照組和DMSO處理組，ERG的結(jié)果顯示，C2處理組的大鼠ERG b波波幅顯著降低；TUNEL結(jié)果表明，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層（GCL）TUNEL陽性的細(xì)胞數(shù)量顯著增多；視網(wǎng)膜GFAP免疫熒光染色明顯增強(qiáng)，提示膠質(zhì)細(xì)胞的活化增多。EPO治療后，ER

4、G b波振幅顯著升高、GFAP表達(dá)降低、活化的膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少、GCL層的細(xì)胞凋亡顯著減少。體外研究顯示，R28細(xì)胞經(jīng)C2處理后，細(xì)胞存活率顯著降低，并與C2呈劑量依賴性。C2能顯著降低原代人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接的完整性，表現(xiàn)為跨內(nèi)皮電阻（TEER）的降低，EPO治療能夠上調(diào)TEER。R28細(xì)胞經(jīng) C2處理48小時(shí)后，Q–PCR結(jié)果顯示質(zhì)膜小泡相關(guān)蛋白（plasmalemma vesicle associated protei

5、n, PLVAP，PV–1）、集群分化因子73（cluster of differentiation73，CD73）和細(xì)胞間粘附分子1（intercellular adhesion molecule,ICAM–1）在轉(zhuǎn)錄水平（mRNA）的表達(dá)顯著增加，并且在EPO治療后顯著降低。
　　結(jié)論：C2眼內(nèi)注射能引起視網(wǎng)膜損傷，主要通過升高PV–1、CD73和ICAM–1的表達(dá)來誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡和血–視網(wǎng)膜內(nèi)屏障的破壞。初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果表