杜仲雄花粉蛋白成分的分離純化研究.pdf

1、杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的花粉是由其雄花產(chǎn)生的，故稱杜仲雄花花粉。早年對(duì)于杜仲的研究主要是局限于杜仲皮和杜仲葉，且以小分子化合物為主。上世紀(jì)70年代起，在國(guó)內(nèi)外掀起了對(duì)花粉的研究熱潮，許多學(xué)者做了大量的研究工作。但是，有關(guān)杜仲花粉的研究和開(kāi)發(fā)，國(guó)內(nèi)外還鮮見(jiàn)報(bào)道。
　　本實(shí)驗(yàn)主要是從杜仲雄花花粉中分離純化出多種生物活性蛋白，為杜仲花粉在保健或醫(yī)療行業(yè)的開(kāi)發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)以杜仲花粉為研究材

2、料，通過(guò)破壁實(shí)驗(yàn)，超聲提取功率、時(shí)間、次數(shù)、料液比、和緩沖液 pH等單因素條件進(jìn)行優(yōu)化，通過(guò)鹽析、透析、葡聚糖凝膠柱色譜法和高效液相色譜法等方法從杜仲雄花花粉中提取出具有生物活性的蛋白組分，并通過(guò)蛋白質(zhì)含量測(cè)定以及紫外線全波長(zhǎng)掃描等方面的分析，主要結(jié)果如下：
　　1、以杜仲花粉破壁率和相應(yīng)的清蛋白得率為指標(biāo)，對(duì)溫差法、液氮混合手工研磨、液氮混合球磨儀研磨這三種花粉破壁方法進(jìn)行比較，得出了液氮混合球磨儀研磨法為實(shí)驗(yàn)室條件下簡(jiǎn)單高效的

3、破壁方法。
　　2、堿溶谷蛋白是杜仲雄花花粉中的蛋白質(zhì)主要成分，占杜仲花粉分級(jí)蛋白提取總量的80％以上。
　　3、通過(guò)對(duì)杜仲雄花粉分級(jí)蛋白提取率的測(cè)定比較，得出了超聲波細(xì)胞破碎儀輔助提取的分級(jí)蛋白總提取率達(dá)到72.22%，分別是浸提法的1.9倍，超聲波清洗儀輔助提取的3.2倍。
　　4、通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)分析確定了杜仲花粉蛋白的最佳超聲提取條件為：溶液提取pH10，料液比1:25，超聲功率300W，超聲時(shí)間10min，超聲

4、次數(shù)4次。
　　5、硫酸銨分級(jí)沉淀過(guò)程中，通過(guò)各個(gè)飽和度的實(shí)驗(yàn)，確定了10%，30%，45%、60%、75%、90%六個(gè)沉淀組分，其中30%蛋白組分是占總沉淀的主要組分，占90%以上，所以試驗(yàn)中以30%這部分作為實(shí)驗(yàn)的主要組分。
　　6、兩次Sephadex G-50色譜層析后，得到了兩個(gè)蛋白組分。高效液相色譜法鑒定這兩個(gè)組分至少有五種以上的蛋白存在。
　　7、通過(guò)對(duì)透析外液的紫外全波長(zhǎng)掃描，顯示在200～225nm遠(yuǎn)