山茶蜂花粉多糖的分離純化和免疫活性研究.pdf

1、山茶(Camellia japonica)屬于山茶科山茶屬植物，根和花可入藥。山茶蜂花粉是一種營養(yǎng)豐富的物質(zhì)，具有很好的保健作用。目前，山茶蜂花粉多糖的研究主要集中在活性上，對山茶蜂花粉多糖分離純化上的研究尚未見報道。本論文主要研究了山茶蜂花粉多糖的分離純化及免疫活性。
　　山茶蜂花粉經(jīng)過熱水煮提，過濾，濃縮，乙醇沉淀，獲得山茶蜂花粉總多糖(WCPP)，經(jīng)分析得到山茶蜂花粉多糖的單糖組成為:2.5％ Man、7.8％ Rha、3.

2、0％ GlcA、37.0％ GalA、12.5％ Glc、15.1％ Gal和22.1％ Ara，并通過凝膠柱對其進行檢測，發(fā)現(xiàn)分子量分布不均一。
　　本論文采用兩種方法對WCPP進行分級:
　　第一，采用乙醇沉淀的方法對WCPP進行分級，分別用30％、50％、70％和80％乙醇對WCPP進行沉淀，獲得四個級份WCPP-30、WCPP-50、WCPP-70和WCPP-80。單糖組成分析表明:WCPP-30含有4.3％ Man

3、、7.4％ Rha、45.4％ GalA、10.6％ Glc、10.3％ Gal、2.1％Xyl和20.2％ Ara; WCPP-50含有2.0％ Man、9.1％ Rha、42.7％ GalA、8.8％ Glc、11.5％Gal、2.0％ Xyl和23.9％ Ara; WCPP-70含有2.1％ Man、8.7％ Rha、1.9％ GlcA、15.5％ GalA、16.3％ Glc、20.6％ Gal、1.5％ Xyl和33.5％ A

4、ra; WCPP-80含有6.3％ Man,4.7％ Rha、4.8％ GalA、42.6％ Glc、12.2％ Gal和29.4％ Ara。采用凝膠柱層析方法對四個級份進行了均一性鑒定，發(fā)現(xiàn)其分子量分布范圍較寬，不易根據(jù)分子量進一步分級。
　　第二，采用離子交換柱層析方法對WCPP進行分級，分別用水、0.1 mol/1NaCl、0.3mol/1 NaCl和0.5 mol/1NaCl進行洗脫，獲得四個級份:WCPP-N、WCPP-

5、1、WCPP-2和WCPP-3。對四個級份進行單糖組成分析得到:WCPP-N含有4.1％Man、1.0％ Rha、69.0％Glc、13.4％ Gal和12.7％ Ara; WCPP-1含有5.4％ Man、4.3％ Rha、2.5％ GlcA、45.0％ GalA、22.7％ Gal、18.0％ Ara和2.0％ Glc; WCPP-2含有1.0％ Man、9.5％ Rha、1.9％ GlcA、30.2％ GalA、1.9％ Glc、

6、19.3％ Gal和36.5％ Ara; WCPP-3含有2.1％ Man、18.8％ Rha、1.1％ GlcA、33.2％ GalA、17.9％ Glc、19.1％ Gal和23.9％ Ara。凝膠柱層析檢測發(fā)現(xiàn)四個級份分子量分布比較廣泛。WCPP-1和WCPP-3含量比較低，未對其進行分離純化，主要對WCPP-N和WCPP-2進行了進一步純化。
　　采用Sephadex G-100凝膠柱層析方法對WCPP-N進行分離純化，獲

7、得WCPP-N-Ⅰ和WCPP-N-Ⅱ兩個級份。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)，WCPP-N-Ⅱ的分子量均一性比WCPP-N-Ⅰ好，因此對WCPP-N-Ⅱ進行了結(jié)構(gòu)分析，核磁結(jié)果顯示，這個級分的主鏈由α-1，4-Glucan，側(cè)鏈由α-1，6-Glucan構(gòu)成，具有支鏈淀粉樣結(jié)構(gòu)。
　　采用Sepharose Cl-6B凝膠柱層析方法對WCPP-2進行純化，得到WCPP-2-Ⅰ、WCPP-2-Ⅱ、WCPP-2-Ⅲ、WCPP-2-Ⅳ和WCPP-2-Ⅴ。經(jīng)

8、檢測發(fā)現(xiàn)，WCPP-2-Ⅰ比較均一，其他四個級份不均一。因此對WCPP-2-Ⅰ進行了結(jié)構(gòu)分析，核磁結(jié)果顯示，WCPP-2-Ⅰ可能含有α-1，2-Rha或α-1，2，4-Rha與α-1，4-GalA交替形成的主鏈，Rha的4位帶有側(cè)鏈分支，側(cè)鏈主要為α-1，5-Ara形成的阿拉伯聚糖，還有少量β-1，4-Gal形成的半乳聚糖。
　　通過體內(nèi)和體外巨噬細胞吞噬實驗可知，山茶蜂花粉WCPP-3級份可以促進機體的巨噬細胞吞噬，但是這種促進