小鼠精胺氧化酶基因SMO啟動子的結(jié)構(gòu)和功能研究.pdf

1、目的:多胺是一類廣泛存在于生物體內(nèi)的小分子化合物,它與細(xì)胞的多種生命活動有關(guān),細(xì)胞內(nèi)多胺的聚集會加速細(xì)胞增殖分化甚至腫瘤的發(fā)生。臨床上應(yīng)用多胺類似物進(jìn)行腫瘤的治療已取得很好效果,為了進(jìn)一步深入研究多胺代謝與腫瘤的關(guān)系,本課題重點(diǎn)研究多胺分解代謝途徑中關(guān)鍵酶之一精胺氧化酶的啟動子結(jié)構(gòu)和功能。
　　方法:用Trizol試劑法從小鼠成纖維細(xì)胞中提取總 RNA,應(yīng)用RNA連接酶介導(dǎo)的5`-RACE法獲得 mSMO的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn);巢式 PC

2、R方法克隆含有 mSMO啟動子的DNA序列,并由此構(gòu)建5`端系列截短的mSMO啟動子熒光素酶的報(bào)告質(zhì)粒;將報(bào)告質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染 Cos7細(xì)胞后,用熒光素酶分析法測定啟動子活性。
　　結(jié)果:確定 mSMO基因至少有6個轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(+1,+4,+27,+31,+51,和+63),且均定位于外顯子1中?？寺～@得 mSMO基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游大約2.1kb的DNA片斷,以此片段為基礎(chǔ)構(gòu)建了11個5端系列截短的啟動子報(bào)告質(zhì)粒。報(bào)告基因分析證實(shí)