2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:克隆小鼠αA-Crystallin基因特異性啟動子活性片段,并構(gòu)建以小鼠αA-Crystallin基因啟動子(αACP)驅(qū)動的增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)雙順反子特異表達(dá)載體,為白內(nèi)障基因治療藥物的開發(fā)提供前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
   方法:利用PCR技術(shù),從小鼠總DNA上擴(kuò)增αA-Crystallin基因特異性啟動子活性片段,應(yīng)用TA克隆技術(shù)構(gòu)建pMD19-T-αACP,克隆小鼠αA-Crystallin基因特異性啟動子活性片

2、段,并通過測序證實(shí)其克隆成功。利用基因重組技術(shù)將小鼠αA-Crystallin基因特異性啟動子活性片段(αACP)替換真核表達(dá)載體pIRES2-EGFP上的CMV啟動子,命名融合質(zhì)粒為pαACP-IRES2-EGFP,將其注射入大鼠幼鼠的晶狀體球后,在熒光顯微鏡下觀察晶狀體冰凍切片,通過增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的表達(dá)效果來驗(yàn)證啟動子的活性。
   結(jié)果:通過pMD19-T-αACP融合質(zhì)粒的測序證實(shí)小鼠αA-Crystallin基因特

3、異性啟動子活性片段(αACP)克隆成功,并構(gòu)建于pIRES2-EGFP質(zhì)粒中形成融合質(zhì)粒pαACP-IRES2-EGFP,對其融合質(zhì)粒上αACP基因片段行PCR擴(kuò)增、酶切圖譜分析獲得412bp的αACP目的條帶,經(jīng)測序鑒定與基因庫中(NC00083)小鼠αACP序列相比有99%的同源性,表明成功構(gòu)建了包含小鼠αA-Crystallin啟動子活性片段(αACP)的特異表達(dá)載體pαACP-IRES2-EGFP,將其注射入大鼠幼鼠的晶狀體球后

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