紅鯽Wnt信號通路相關(guān)基因克隆和表達(dá)及應(yīng)答鎘金屬脅迫的機(jī)制初探.pdf

1、IItllllllJllllllllllJIIl[1lllllLlll]lllll[1lllllllY3233584轡潮南鉀軾大學(xué)碩士學(xué)位論文紅鯽Wnt信號通路相關(guān)基因克隆和表達(dá)及應(yīng)答鎘金屬脅迫的機(jī)制初探學(xué)科專業(yè)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)位類型團(tuán)科學(xué)學(xué)位。專業(yè)學(xué)位導(dǎo)師姓名、職稱型圭塑塾絲論文編號湖南師范大學(xué)學(xué)位評定委員會(huì)辦公室二零一七年四月摘要IIIIIIIllllIIIIIIIIIIIIIlY3233584Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在器官的發(fā)生、癌癥以及多

2、細(xì)胞生物體軸分化過程中起著重要作用。本論文主要以紅鯽中的GSK3p和Dvl2基因作為研究對象。首先采用RACE克隆技術(shù)獲得紅鯽GSK3p和Dvl2基因的cDNA全長，再分別通過半定量RTPCR技術(shù)和蛋白免疫印記(WesternBlot)技術(shù)分析GSK3p和Dvl2基因在mRNA水平和蛋白水平上的表達(dá)。最后通過一定濃度的鎘處理，比較分析了GSrdl3與Dcatenin的表達(dá)情況。結(jié)果顯示：(1)Dvl2基因全長為3042bp，編碼754個(gè)

3、氨基酸，預(yù)測蛋白分子量約為8236064，等電點(diǎn)為589。Dvl2基因蛋白序列和斑馬魚的相似度是953％，與鯉魚的相似度是972％，與小鼠的相似度是688％，與非洲爪蟾的相似度是705％，與人的相似度是673％。揭示了紅鯽Dvl2基因在進(jìn)化中保守性不高。(2)GSK3[3基因全長為2195bp，編碼421個(gè)氨基酸，預(yù)測蛋白分子量約為4684640，等電點(diǎn)為905。比較不同物種氨基酸的同源相似性，GSK313蛋白序列和斑馬魚的相似度是98

4、5％，與小鼠的相似度是942％，與非洲爪蟾的相似度是921％，與人的相似度是947％?？梢钥闯鱿嗨贫缺戎刀驾^高，表明在進(jìn)化過程中紅鯽GSK3p基因中擁有較高的保守性。(3)經(jīng)過半定量RTPCR的分析發(fā)現(xiàn)Dvl2基因在紅鯽8個(gè)組織中表達(dá)最高的是精巢，表達(dá)量排列第二的是眼睛，其中大腦、肌肉、皮膚和卵巢4種組織表達(dá)相對持平且較高，肝臟和腎臟中的表達(dá)相對較低。GSK3f3基因在紅鯽8個(gè)組織中表達(dá)最高的是眼睛，其次分別是大腦和肌肉，其余四個(gè)組織中