2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:
  牙周膜干細(xì)胞(Periodontal ligament stem cells,PDLSCs)是間充質(zhì)來(lái)源的干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs),是骨組織工程種子細(xì)胞的重要來(lái)源之一[1-3]。骨組織再生過(guò)程復(fù)雜,受多種細(xì)胞因子及信號(hào)通路的調(diào)節(jié)[4]。趨化因子CXCL12可通過(guò)在機(jī)體損傷部位募集MSCs促進(jìn)組織的修復(fù)和再生,是重要的MSCs調(diào)節(jié)因子之一[5-6],最新研究顯示CXCL12可能直接

2、參與組織修復(fù)中的血管再生過(guò)程[7-8],但CXCL12調(diào)控PDLSCs促進(jìn)血管生成的作用還未見相關(guān)報(bào)道。因此,本研究通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn),探討人PDLSCs過(guò)表達(dá)CXCL12后成血管相關(guān)因子的表達(dá)情況以及促進(jìn)大鼠顱骨標(biāo)準(zhǔn)骨缺損修復(fù)的作用,希望可以為骨組織再生的臨床治療提供一定的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
  方法:
  1.人牙周膜干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)以及鑒定:酶消化法分離培養(yǎng)人牙周膜干細(xì)胞,油紅O脂類染色及堿性磷酸酶染色確定PDLSCs

3、的多向分化潛能,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PDLSCs的間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物表達(dá),明確原代培養(yǎng)的PDLSCs具有間充質(zhì)干細(xì)胞特性及多向分化潛能。
  2.過(guò)表達(dá)CXCL12促進(jìn)人PDLSCs成血管相關(guān)因子表達(dá)的體外研究:利用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)將CXCL12慢病毒載體轉(zhuǎn)染進(jìn)入人牙周膜干細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后1天、4天、7天、14天利用real-time PCR檢測(cè)成血管相關(guān)因子的mRNA表達(dá)水平,Western Blot蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)成血管相關(guān)因子的

4、蛋白表達(dá)水平;病毒轉(zhuǎn)染后4小時(shí)和48小時(shí),利用Matrigel類毛細(xì)血管形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)類毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)形成能力。
  3.過(guò)表達(dá)CXCL12促進(jìn)人PDLSCs成血管相關(guān)因子表達(dá)的體內(nèi)研究:構(gòu)建SD大鼠顱骨標(biāo)準(zhǔn)骨缺損動(dòng)物模型,利用β-磷酸三鈣(β-TCP)體外構(gòu)建細(xì)胞材料復(fù)合體,植入SD大鼠顱骨缺損部位;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)共分為4組:Lenti-CXCL12-GFP/PDLSCs/β-TCP組,Lenti-GFP/PDLS Cs/β-TCP組,

5、PDLSCs/β-TCP組,β-TCP組。2個(gè)月后,通過(guò)蘇木素伊紅染色檢測(cè)缺損部位的新骨形成,micro-CT對(duì)缺損部位形成的新骨進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析,免疫組織化學(xué)檢測(cè)缺損部位的成血管相關(guān)因子的表達(dá)情況。
  結(jié)果:
  1.酶消化法成功獲得PDLSCs,流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞高表達(dá)CD90、CD44和CD105,低表達(dá)CD146,不表達(dá)CD45,表明其具有間充質(zhì)來(lái)源干細(xì)胞特性;油紅O脂類染色及堿性磷酸酶染色,結(jié)果為陽(yáng)性,確定所

6、獲得的PDLSCs具有成脂及成骨的多向分化潛能。
  2.當(dāng)MOI=5時(shí),慢病毒轉(zhuǎn)染效率最高,轉(zhuǎn)染效率大于90%。real-time PCR結(jié)果顯示:與對(duì)照組相相比,CXCL12過(guò)表達(dá)組中成血管相關(guān)因子VEGF、bFGF、PLGF和SCF的mRNA表達(dá)水平較高,且具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);Western Blot結(jié)果顯示:病毒轉(zhuǎn)染后,各組內(nèi)成血管相關(guān)因子VEGF、bFGF、PLGF和SCF的表達(dá)隨著時(shí)間的推移而逐漸增高,

7、而CXCL12過(guò)表達(dá)組中成血管相關(guān)因子蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組,且具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);Matrigel類毛細(xì)血管形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染后48小時(shí),CXCL12過(guò)表達(dá)組可以形成更明顯的類毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)。
  3.SD大鼠顱骨標(biāo)準(zhǔn)骨缺損模型構(gòu)建成功;蘇木素伊紅染色結(jié)果顯示:Lenti-CXCL12-GFP/PDLSCs/β-TCP組中缺損部位被大量的紅染物質(zhì)填充,提示有更多的新骨樣結(jié)構(gòu)形成;micro-CT分析結(jié)果提

8、示:Lenti-CXCL12-GFP/PDLSCs/β-TCP組中骨缺損部位幾乎被新骨充填,BMD值,BV/TV值均高于對(duì)照組,且具有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:Lenti-CXCL12-GFP/PDLSCs/β-TCP組缺損部位有更多的成血管相關(guān)因子VEGF、bFGF、PLGF和SCF的表達(dá),統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯(P<0.05)。
  結(jié)論:
  1.CXCL12可以促進(jìn)牙周膜干細(xì)胞高表達(dá)成血管相關(guān)因

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