缺氧條件下腎腺癌細胞和腎小管上皮細胞調節(jié)血管新生的差異研究.pdf

1、目的:腎細胞癌(RCC)組織內血管多呈過度生長，而慢性腎臟病(CKD)卻與之相反，即代償性血管新生不足以及間質微血管進行性缺失。此種差異可能是由于腎癌細胞對于局部缺氧環(huán)境的應答有別于腎小管上皮細胞，但是具體的分子機制仍然不清楚?；|金屬蛋白酶(MMPs)及其調節(jié)分子既能調節(jié)血管新生也能影響腫瘤細胞遷移，可能在其中發(fā)揮了作用。本次研究的目的是探討缺氧對人類腎腺癌細胞(786-0)、人類腎小管上皮細胞(HK2)和人類微血管內皮細胞（HMEC

2、-1）中MMP2、MMP9、MMP14、TIMP2和RECK等蛋白表達的影響，并且使用共培養(yǎng)的方法進一步研究786-0和HK2細胞對鄰近的HMEC-1細胞中RECK表達、細胞增殖以及血管成環(huán)能力的影響。
　　方法:使用氯化鉆干預的方法模擬786-0、HK2和HMEC-1細胞所在的缺氧環(huán)境。使用western blot方法檢測常氧和缺氧條件下細胞中HIF-1α、MMP2、MMP9、MMP14、TIMP2和RECK等蛋白表達情況。在氯

3、化鈷處理條件下，將786-0和HK2細胞分別與HMEC-1共培養(yǎng)24小時，之后單獨收集HMEC-1細胞進行western blot、細胞增殖以及血管成環(huán)實驗，并且分別收集兩種共培養(yǎng)體系中的上清，使用明膠酶譜法檢測其中MMP2和MMP9活性。
　　結果:使用一定濃度氯化鈷(150μmol/L)分別處理三種細胞24小時后，細胞中HIF-1α的表達均明顯升高，其中786-0細胞內RECK蛋白表達明顯下降，而與此相反在HK2和HMEC-1

4、細胞中RECK表達則輕度增加。同時，我們還觀察到786-0和HK2細胞中MMP2表達輕度下降，而在HMEC-1細胞中MMP2蛋白表達明顯增加。常氧條件下，共培養(yǎng)體系中的786-0細胞和HK2細胞均能夠上調鄰近HMEC-1細胞中RECK表達。然而，在缺氧條件下，與786-0細胞共培養(yǎng)的HMEC-1細胞顯著下調了RECK表達，而在HMEC-1和HK2共培養(yǎng)體系中則沒有明顯變化。我們同時也觀察到786-0顯著增強了鄰近HMEC-1細胞的增殖和