HPV16E6、HPV18E7原癌蛋白免疫組化試劑盒的建立.pdf

1、宮頸癌是由人乳頭瘤病毒（Human papllomavirus,HPV）引起的一種常見的高發(fā)于女性的惡性腫瘤，其死亡率高居女性腫瘤第二位。近年來統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，我國農(nóng)村地區(qū)宮頸癌篩查范圍覆蓋低，農(nóng)村地區(qū)發(fā)病率和致死率均高于城市，并呈逐年增長趨勢且發(fā)病年齡趨向年輕化，嚴(yán)重威脅女性健康。高危型 HPV呈持續(xù)感染，尤其是HPV16和HPV18兩個型，是導(dǎo)致宮頸癌的根本原因。此外，E6和E7蛋白的過表達(dá)在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中起到至關(guān)重要的作用，為潛在的宮頸

2、癌早期診斷標(biāo)志物。
　　目的：目前我國尚無商業(yè)化的基于HPV16E6和HPV18E7蛋白的免疫組化試劑盒，用于檢測臨床樣本中的HPV16和HPV18。用于臨床HPV16和HPV18檢測的多為HPV DNA檢測，不利于資源匱乏地區(qū)推廣。為此，建立擁有自主知識產(chǎn)權(quán)的，基于HPV16E6和HPV18E7蛋白的免疫組化試劑盒更具優(yōu)勢。我們的目的是，以HPV16E6和HPV18E7蛋白為診斷標(biāo)志物，建立特異性好、成本低的HPV16E6和HP

3、V18E7蛋白免疫組化試劑盒，用于宮頸癌的早期診斷。
　　方法：本課題采用經(jīng)鑒定的 HPV16E6和 HPV18E7重組蛋白為抗原，分別用于抗HPV16E6和HPV18E7單克隆抗體的制備。并基于抗HPV16E6和抗HPV18E7單抗，分別建立宮頸癌細(xì)胞系的HPV16E6和HPV18E7蛋白檢測免疫組化試劑盒。在此基礎(chǔ)上，將建立的免疫組化試劑盒應(yīng)用于臨床樣本的檢測。
　　結(jié)果：
　?。?）以純化的HPV16E6和HPV

4、18E7蛋白為抗原免疫小鼠，經(jīng)過亞克隆篩選，分別得到了7株和8株可穩(wěn)定分泌特異性高、親和性好的抗HPV16E6單抗和抗HPV18E7單抗的雜交瘤細(xì)胞株，并分別選擇效價最高的屬IgG亞類單抗的HPV16E6-4D4、HPV18E7-E11細(xì)胞株進(jìn)行單抗的制備與鑒定；
　?。?）基于HPV16E6-4D4、HPV18E7-E11單克隆抗體，分別初步建立了宮頸癌細(xì)胞系的HPV16E6和HPV18E7蛋白免疫組化檢測試劑盒；
　?。?/p>