水產(chǎn)品中四環(huán)素類藥物膠體金免疫層析試紙條的研制.pdf

1、四環(huán)素類藥物主要包括四環(huán)素、土霉素、金霉素等，由于較高濃度時(shí)其具有良好的殺菌作用，所以被廣泛的應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，也就不可避免的出現(xiàn)了濫用現(xiàn)象，造成了嚴(yán)重的藥物殘留。而四環(huán)素類藥物可引起人類的過敏反應(yīng)等一系列疾病，對(duì)人體和環(huán)境具有嚴(yán)重的危害?，F(xiàn)階段針對(duì)于四環(huán)素類藥物的檢測方法存在著操作繁瑣、檢測費(fèi)用高等不適合推廣使用的缺點(diǎn)，建立快速靈敏的四環(huán)素類藥物檢測方法十分必要。
　　膠體金免疫層析試紙條法自發(fā)現(xiàn)至今已在多個(gè)領(lǐng)域被普遍使用，主要就

2、是其快速高效、安全簡便。本文對(duì)試紙條制備過程中的條件進(jìn)行探索和優(yōu)化，從而制得靈敏度高的四環(huán)素類藥物膠體金免疫層析試紙條。
　　本文膠體金的制備主要是利用檸檬酸三鈉還原法，并通過研究對(duì)制備過程中影響因素進(jìn)行優(yōu)化，最終在先加入100 mL0.01％的氯金酸溶液，后加入0.5 mL4％檸檬酸三鈉溶液，在轉(zhuǎn)速是200 r/min，溶液變紅后控制溫度檔是400℃（沸騰時(shí)實(shí)際溫度為100℃），加熱時(shí)間是10 min條件下制得了本試驗(yàn)所需粒徑為

3、20 nm左右膠體金溶液。
　　將制得的膠體金放置至室溫后用0.22μm濾膜進(jìn)行過濾，并取過濾后的膠體金利用紫外可見分光光度計(jì)對(duì)其進(jìn)行光譜掃描，從而可以初步判定膠體金的質(zhì)量。經(jīng)過初步判定合格的膠體金，可以用來進(jìn)行下一步膠體金標(biāo)記抗體試驗(yàn)。通過對(duì)影響膠體金標(biāo)記的溶液pH、標(biāo)記時(shí)間、加入抗體的稀釋倍數(shù)、抗體的具體加入量等進(jìn)行了系列的研究，在1 mL膠體金溶液中加入5μL0.2 mol/L的K2CO3使溶液的pH大約為8.0，標(biāo)記時(shí)間為

4、30 min，抗體稀釋倍數(shù)是6倍、抗體加入量是9.6μg條件下制得了所需金標(biāo)抗體，并對(duì)所制得金標(biāo)抗體質(zhì)量進(jìn)行了初步判定。
　　通過對(duì)NC膜的選擇，包被液巾離子強(qiáng)度、包被濃度、金標(biāo)墊前處理等因素的研究，在使用Millipore135型號(hào)的NC膜，包被液中NaCl的濃度為8.5 g/L，檢測線上使用濃度為1.0 mg/mL的四環(huán)素類抗原進(jìn)行包被，質(zhì)控線上使用濃度是0.75 mg/mL羊抗鼠二抗進(jìn)行包被的條件下制得了本試驗(yàn)所需試紙條。并