高滲鹽水點眼制作的小鼠干眼模型與評估

1、高滲鹽水點眼制作的小鼠干眼模型與評估高滲鹽水點眼制作的小鼠干眼模型與評估李晶，付川，謝漢平（400038重慶，第三軍醫(yī)大學(xué)西南眼科醫(yī)院）[摘要]目的目的通過高滲鹽水點眼提高淚液滲透壓制作小鼠干眼模型并對該模型進行評估。方法方法60只雌性6～8周齡BALBc小鼠，采用隨機數(shù)字表法分為空白組、對照組和實驗組，每組20只。對照組采用308mOsmolL氯化鈉溶液點眼，每天5次，實驗組采用500mOsmolL氯化鈉溶液點眼，每天5次，空白組不點

2、眼。分別在第0，7，14，28，42天行SchirmerⅠ實驗、角膜熒光素鈉染色和評分、眼表虎紅染色觀察、淚液蕨類實驗、角膜上皮HE染色觀察、角膜上皮厚度測量、結(jié)膜上皮PAS染色觀察和杯狀細胞計數(shù)。第42天行角膜上皮掃描電子顯微鏡觀察。結(jié)果結(jié)果第0天各組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。第7天起，與空白組[（3.00.5）mm]和對照組[（3.10.5）mm]相比，實驗組[（2.30.4）mm]BALBc小鼠出現(xiàn)淚液生成明顯減少（

3、P＜0.05)，角膜熒光素鈉染色和虎紅染色出現(xiàn)點、片狀著色，角膜熒光素鈉染色評分升高（3組分別為0.91.2、0.50.7、1.41.6，P＜0.01），淚液蕨類圖形減少。第14天起，與空白組和對照組相比，實驗組BALBc小鼠結(jié)膜杯狀細胞計數(shù)減少（3組分別為10.62.0、11.81.3、5.41.8，P＜0.01）。角膜上皮基底部細胞排列紊亂缺失，角膜上皮分層減少，出現(xiàn)空泡，角膜上皮層厚度減少[3組分別為（21.693.41）、（21

4、.232.64）、（15.821.38）μm，P＜0.05]，角膜上皮細胞微絨毛丟失。結(jié)論高滲鹽水可以在小鼠眼表引起類似干眼的病理損害，淚液高滲透壓在干眼的發(fā)病中起重要作用。[關(guān)鍵詞]干眼；淚液；高滲透壓[中圖法分類號][文獻標(biāo)志碼]AMousemodelofdryeyeinducedbyhyperosmolarsalineitsevaluationLiJingFuChuanXieHanping(SouthwestHospitalofO

5、phthalmologyThirdMilitaryMedicalUniversityChongqing400038China)[Abstract]ObjectiveToevaluatethemousemodelofdryeyeinducedbyhyperosmolarsaline.MethodsSixtyfemaleBALBcmiceattheageof68weekswereromlydividedintoblankgroupcontr

6、olgroupexperimentalgroup20ineachgroup.Miceincontrolexperimentalgroupsweretreatedwith308mOsmolL500mOsmolLsodiumchlidesolutionrespectively5timesaday.Miceinblankgroupwerenottreatedwithsodiumchlidesolution.Schirmertestfluesc

7、einstainingcnealscingrosebengalstainingtearfernsexperimentcnealepithelialHEstainingthicknessmeasurementconjunctivalepithelialPASstainingGobletcellcountingwereconductedondays07142842respectively.Cnealsurfacewasobservedbys

8、canningelectronmicroscopyonday42.ResultsNosignificantdifferencewasfoundintheaboveparametersonday0betweenthetwogroups.Onday7thevolumeoftearswassignificantlysmallerinexperimentalgroup(2.30.4mm)thaninblankgroup(3.00.5mm)con

9、trolgroup(3.10.5mm)(P＜0.05).Spottypatchystainingwasobservedoncnea.Thesceofcnealfluesceinstainingrosebengalstainingwashigherinexperimentalgroup（1.41.6）thaninblankcontrolgroups(0.91.20.50.7)(P＜0.01).Onday14thenumberofGoble

10、tcellswas10.62.011.81.35.41.8respectivelyin3groups(P＜0.01).Thebasalcnealepithelialcellswereabnmallyarrangedwithvacuoles.Thethicknessofcnealepithelium21.693.41μm21.232.64μm15.821.38μmrespectivelyin3groupswithlossofmicrovi

11、llioncnea(P＜0.05).ConclusionHyperosmolarsalinecancausepathologicallesionssimilartodryeyeonocularsurfaceofmicethusplayinganimptantroleinpathogenesisofdryeye.[Keywds]dryeyetearshighosmoticpressureCrespondingauth：XieHanping

12、，862368765377，Email:xiehanping@.cn干眼(dryeyesyndrome)又稱角結(jié)膜干燥癥(keratoconjunctivitissicca)或者淚液功能不全綜合征(dysfunctionaltearsyndrome)[1]，是指任何原因引起的淚液質(zhì)和量異常或動力學(xué)異常導(dǎo)致的淚膜穩(wěn)定性下降，并伴有眼部不適，導(dǎo)致眼表組織病變?yōu)樘卣鞯募膊】偡Q，是最常見的眼表疾病。美國的調(diào)查顯示：不同的年齡組，干眼的發(fā)病率從5

13、%到30%不等。亞洲干眼的發(fā)病率為20％[1]。人口老齡化可能會進一步提高干眼的發(fā)病率。[通信作者]謝漢平，電話：(023)68765377，Email:xiehanping@.cn為研究干眼，研究者使用鼠、兔和狗制作了多種的干眼動物模型?；究梢苑譃闇I液生成不足型，淚液蒸發(fā)過強型或者兩者混合型[2]。但是由于干眼病因繁多，病理過程復(fù)雜，各因素之間的聯(lián)系或因果關(guān)系尚未完全明了，至今尚無一種動物模型可以準(zhǔn)確模仿出該病頻繁發(fā)生、逐漸惡化、進

14、展緩慢、機制復(fù)雜的特點[3]。干眼的發(fā)生存在共同的最終通路是淚膜不穩(wěn)，淚液中電解質(zhì)濃度的升高導(dǎo)致淚液滲透壓升高[1]。淚液滲透壓升高可以導(dǎo)致眼表上皮細胞產(chǎn)生前炎性細胞因子，誘導(dǎo)CD4T細胞向輔助性Th17a：P＜0.05，b：P＜0.01，與實驗組比較圖1點眼后不同時間點各組淚液分泌量的比較點眼后不同時間點各組淚液分泌量的比較2.2角膜熒光素染色和評分第0天，空白組、實驗組、對照組均有BALBc小鼠角膜出現(xiàn)少許點狀著色，角膜評分各組差異

15、無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。實驗組BALBc小鼠隨著實驗的進行，角膜中央點狀著色增加，逐漸出現(xiàn)片狀著色，病變累及角膜各個象限，以角膜中央為重(圖2)。從第7天起，實驗組角膜熒光素染色評分和第0天比較明顯上升(P＜0.01)，并且逐漸上升。實驗組第7天角膜熒光素染色評分較第0天上升了75％(表1)。A：空白組角膜熒光素染色；B：實驗組第14天角膜熒光素染色示中央角膜點片狀著色；C：實驗組第28天角膜熒光素染色示3個象限點片狀著色；D：實

16、驗組第42天角膜熒光素染色示全角膜點片狀著色圖2點眼后不同時間空白組和實驗組點眼后不同時間空白組和實驗組BALBcBALBc小鼠角膜熒光素染色觀察小鼠角膜熒光素染色觀察表1點眼后不同時間各組點眼后不同時間各組BALBcBALBc小鼠角膜熒光素染色評分比較小鼠角膜熒光素染色評分比較（n=10）組別0d7d14d28d42d空白組0.70.70.91.2a1.01.3a0.60.8a0.60.8a對照組0.40.70.50.7a0.60.8

17、a0.50.7a0.40.7a實驗組0.81.01.41.62.02.47.73.86.24.5a：P＜0.01，與實驗組比較2.3眼表虎紅染色空白組和對照組部分BALBc小鼠眼表虎紅染色可見少量點狀著色，實驗組BALBc小鼠從第7天開始點狀著色逐漸增加，并且出現(xiàn)片狀著色，累計4個象限，以中央和鼻側(cè)角膜為重(圖3)。A：空白組角膜虎紅染色；B：實驗組第14天角膜虎紅染色示1個象限點片狀著色；C：實驗組第28天角膜虎紅染色示2個象限點片狀

18、著色；D：實驗組第42天角膜虎紅染色示3個象限點片狀著色圖3點眼后不同時間空白組和實驗組點眼后不同時間空白組和實驗組BALBcBALBc小鼠角膜虎紅染色觀察小鼠角膜虎紅染色觀察2.4淚液蕨類實驗空白組和對照組BALBc小鼠淚液在顯微鏡下進行淚液蕨類結(jié)晶圖像分析可以觀察到形態(tài)良好的蕨類物形成。實驗組BALBc小鼠淚液結(jié)晶中的蕨類物從第7天開始逐漸減少，蕨類物之間的連接中斷。第28天以后顯微鏡下僅能觀察到稀少的小蕨類物，甚至完全消失(圖4)