甘肅省昆蟲病原線蟲分子生物學鑒定.pdf

1、昆蟲病原線蟲是一類寶貴的天敵資源，對農(nóng)、林及衛(wèi)生害蟲的綜合治理、環(huán)境保護以及實現(xiàn)農(nóng)田生物多樣性，都具有重要的學術和實用價值。目前，國內(nèi)、外對昆蟲病原線蟲的分類研究主要集中在形態(tài)學和生物化學等方面，運用分子生物學技術對線蟲系統(tǒng)發(fā)育進行研究還處在起步階段。 本研究應用PCR擴增并測定了根據(jù)形態(tài)學鑒定方法鑒定出的在甘肅省采集的29個不同地理群體8種昆蟲病原線蟲的rDNA序列，獲得26S DNA基因約1100bp長度的序列片段，結(jié)果顯示

2、所測定的序列都具有較強的系統(tǒng)發(fā)育信號。鑒定結(jié)果與實驗室采用形態(tài)學方法對這些線蟲進行詳細鑒定所得的結(jié)果完全一致。 鑒于線蟲混合蟲口問題和種間差異不顯著等特點，本研究摸索出單條線蟲PCR擴增的成熟條件對全部29個地理群體的線蟲樣品ITS區(qū)進行了PCR擴增，結(jié)合Genbank上的昆蟲病原線蟲序列做出了系統(tǒng)發(fā)育樹。 用Alul限制性內(nèi)切酶對擴增產(chǎn)物進行了RFLP分析，結(jié)果表明：不同地理種群的線蟲ITS區(qū)擴增片段長度均在1100b

3、p左右，酶切圖譜種間差異不大，也不存在種內(nèi)群體的變異多態(tài)性。 本研究提供了一個對大量昆蟲病原線蟲樣本進行快速初步鑒定的方法，對昆蟲病原線蟲資源調(diào)查和分子系統(tǒng)學等方面的研究具有重要意義。 對在甘肅省采集的8種昆蟲病原線蟲進行了抗干燥能力測定，結(jié)果表明：昆蟲病原線蟲種類不同，其抗干燥能力也不同。在25℃、相對濕度50．5%的小空間控制器中分別處理5小時、7小時和9小時后，斯氏線蟲仍具有較高的存活率，而異小桿類線蟲幾乎全部死亡