分子生物學總結

1、問答題：1衰老與基因的結構與功能的變化有關，涉及到：衰老與基因的結構與功能的變化有關，涉及到：（1）生長停滯；（2）端?？s短現(xiàn)象；（3）DNA損傷的累積與修復能力減退；（4）基因調控能力減退。2超螺旋的生物學意義：超螺旋的生物學意義：（1）超螺旋的DNA比松馳型DNA更緊密，使DNA分子體積變得更小，對其在細胞的包裝過程更為有利；（2）超螺旋能影響雙螺旋的解鏈程序，因而影響DNA分子與其它分子（如酶、蛋白質）之間的相互作用。3原核與真核

2、生物學原核與真核生物學mRNA的區(qū)別：的區(qū)別：原核：（1）往往是多順反子的，即每分子mRNA帶有幾種蛋白質的遺傳信息（來自幾個結構基因）。（2）5端無帽子結構，3端一般無多聚A尾巴。（3）一般沒有修飾堿基，即這類mRNA分子鏈完全不被修飾。真核：（1）5端有帽子結構（2）3端絕大多數(shù)均帶有多聚腺苷酸尾巴，其長度為20200個腺苷酸。（3）分子中可能有修飾堿基，主要有甲基化，（4）分子中有編碼區(qū)與非編碼區(qū)。4tRNA的共同特征：的共同特征

3、：（?。﹩捂溞》肿?，含7393個核苷酸。（2）含有很多稀有堿基或修飾堿基。（3）5端總是磷酸化，5末端核苷酸往往是pG。（4）3端是CPCPAOH序列。（5）分子中約半數(shù)的堿基通過鏈內堿基配對互相結合，開成雙螺旋，從而構成其二級結構，開頭類似三葉草。（6）三級結構是倒L型。5核酶分類：核酶分類：（1）異體催化的剪切型，如RNaseP；（2）自體催化的剪切型，如植物類病毒等；（3）內含子的自我剪接型，如四膜蟲大核26SrRNA前體。6hn

4、RNA變成有活性的成熟的變成有活性的成熟的mRNA的加工過程的加工過程：（1）5端加帽；（2）3端加尾（3）內含子的切除和外顯子的拼接；（4）分子內部的甲基化修飾作用，（5）核苷酸序列的編輯作用。7反義反義RNA及其功能：及其功能：堿基序列正好與有意義mRNA互補的RNA稱為反意義或反義RNA，又稱調節(jié)RNA，這類RNA是單鏈RNA，可與mRNA配對結合形成雙鏈，最終抑制mRNA作為模板進行翻譯。這是其主要調控功能，還可作為DNA復制的

5、抑制因子，與引物RNA互補結合抑制DNA的復制，以及在轉錄水平上與mRNA5末端互補，阻止RNA合成轉錄。8病毒基因組分型：病毒基因組分型：（1）雙鏈DNA（2）單鏈正股DNA（3）雙鏈RNA（4）單鏈負股RNA（5）單鏈正股RNA9病毒基因組結構與功能的特點：病毒基因組結構與功能的特點：（1）不同病毒基因組大小相差較大；（2）不同病毒的基因組可以是不同結構的核酸。（3）病毒基因組有連續(xù)的也有不連續(xù)的；（4）病毒基因組的編碼序列大于90

6、%；（5）單倍體基因組，（6）基因有連續(xù)的和間斷的，（7）相關基因叢集；（8）基因重疊（9）病毒基因組含有不規(guī)則結構基因，主要類型有：a幾個結構基因的編碼區(qū)無間隔；bmRNA沒有5端的帽結構；c結構基因本身沒有翻譯起始序列。10原核生物基因組的結構的功能特點：原核生物基因組的結構的功能特點：（1）基因組通常僅由一條環(huán)狀雙鏈DNA分子組成。（2）基因組中只有1個復制起點。（3）具有操縱子結構。（4）編碼順序一般不會重疊。（5）基因是連續(xù)的

7、，無內含子，因此轉錄后不需要剪切。（6）編碼區(qū)在基因組中所占的比例（約占50%）遠遠大于真核基因組，但又遠遠小于病毒基因組。（7）基因組中重復序列很少（8）具有編碼同工酶的基因。（9）細菌基因組中存在著可移動的DNA序列，包括插入序列和轉座子。（10）在DNA分子中具有多種功能的識別區(qū)域。11真核生物基因組結構與功能的特點：真核生物基因組結構與功能的特點：（1）每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目，除了配子為單倍體外，體細胞一般為雙倍體。

8、（2）真核基因組遠遠大于原核生物的基因組，結構復雜，基因數(shù)龐大。（3）都由一個結構基因與相關的調控區(qū)組成，轉錄產物為單順反子。（4）含有大量重復順序。（5）基因組內非編碼的順序占90%以上。（6）真核基因是斷裂基因，（7）功能相關的基因構成各種基因家族，它們可串聯(lián)在一起，亦可相距很遠，但即使串聯(lián)在一起的成簇的基因也是分別轉錄的。（8）真核生物基因組中也存在一些可移動的遺傳因素，這些DNA順序并無明顯生物學功能，似乎為自己的目的而組織，故

9、有自私DNA之稱。12根據(jù)同源性程度，主要分五種類型：根據(jù)同源性程度，主要分五種類型：（1）核酸序列相同，實際上是多拷貝基因；（2）核酸序列高度同源，如人類生長激素基因家族；（3）編碼產物具有同源功能區(qū)；（4）編碼產物具有小段保守基序；（5）基因超家族。13DNA復制的基本過程：復制的基本過程：（1）DNA雙鏈解開；（2）RNA引物的合成；（3）DNA鏈的延長；（4）切除引物、填補缺口、連接相鄰DNA片段；（5）切除和修復錯配堿基。14

10、DＮＡ的損傷方式：ＮＡ的損傷方式：（１）轉換：由一種嘧啶變成另一種嘧啶，或種嘌呤變成另一種嘌呤；（２）顛換：嘧呤與嘌呤互換。轉換和顛換只引起ＤＮＡ局部的改變，而ＤＮＡ其它部分的結構不受影響，故稱為點突變。（３）丟失或插當物理或化學信號刺激受體時，受體活化，與G蛋白結合并使之發(fā)生構象改變。A亞基與GDP的親和力下降，結合的GDP為GTP所取代。A亞基結合了GTP后即與BR亞基發(fā)生解離，成為活化狀態(tài)的A亞基。活化了的A亞基此時可以作用于下游

11、的各種效應分子。這種活化狀態(tài)將一直持續(xù)到GTP被A亞基自身具有的GTP酶水解為GDP。33小分子細胞內信使一般具有的三個特點：小分子細胞內信使一般具有的三個特點：（1）不位于能量代謝途徑的中心；（2）在細胞中的濃度或分布可以迅速地改變；（3）作為變構效應劑作用于相應的靶分子，已知的靶分子主要為各種蛋白激酶。34表皮生長因子受體（表皮生長因子受體（EGFR）介導的信號轉導途徑）介導的信號轉導途徑EGFR——Ras——MAPK（1）受體二聚

12、體的形成及其磷酸化；（2）募集接頭蛋白Grb2：（3）調控分子SOS的活化（4）低分子量G蛋白Ras的活化；（5）MAPK的級聯(lián)激活；（6）轉錄因子的磷酸化及其轉錄調控作用。35r——干擾素受體介導的細胞轉導途徑：干擾素受體介導的細胞轉導途徑：r干擾素與受體結合以后。也可以導致受體二聚體化，二聚體化的體可以激活JALSTAT系統(tǒng)，后者將干擾素刺激信號傳入核內。JAK為一種存在于胞漿中的蛋白酪氨酸激酶，它活化后可使干擾素受體磷酸化。STA

13、T可以通過其SH2結構域識別磷酸化的受體并與之結合，然后STAT分子亦發(fā)生酪氨酸的磷酸化，酪氨酸磷酸化的STAT形成二聚體并進入胞核。二聚體STAT分子作為有活性的轉錄因子，影響相關基因的表達，進而改變靶細胞的增殖與分化。36Klenow片段的用途：片段的用途：（1）補齊雙鏈DNA的3末端；（2）通過補齊3端使3末端標記；（3）在cDNA克隆中，第二股鏈的合成。（4）DNA序列分析。37幾種常見修飾酶：幾種常見修飾酶：（1）DNA聚合酶

14、I：這個酶除有聚合酶活性外，尚有35及53核酸外切酶活性。由于它具有53核酸外切酶活性，當用缺口平移法標記DNA探針時，常用DNA聚合酶I。（2）逆轉錄酶：逆轉錄酶以RNA為模板合成DAN，合成時需要4種脫氧核苷酸及引物，合成方向為53延伸，無35外切酶活性。廣泛用于mRNA為模板合成cDNA，構建cDNA文庫。（3）T4DNA連接酶：催化雙鏈DNA一端3OH與另一雙鏈DNA的5端磷酸根形成3、5磷酸二酯鍵，使具有相同粘性末端或平端的D

15、NA末端連接起來。（4）堿性磷酸酶：去除DNA或RNA5端的磷酸根，制備載體時，用堿性磷酸酶處理后，可防止載體自身連接，提高重組效率。（5）末端脫氧核苷酰轉移酶：（TdT）：將脫氧核苷酸加到DNA的3OH上，主要用于探針標記；或者在載體和待克隆的片段上形成同聚物尾，以便于進行連接。（6）TaqDNA聚合酶和其它耐熱DNA聚合酶。38作為克隆載體的質粒具備以下特點：作為克隆載體的質粒具備以下特點：（1）分子量相對較小，能在細菌內穩(wěn)定存在，

16、有較高的拷貝數(shù)。（2）具有一個以上的遺傳標志，便于對宿主細胞進行選擇，（3）具有多個限制酶的單一切點，稱為多克隆位點（MCS）。3939粘性質粒的特點：粘性質粒的特點：（1）含有質粒的抗藥性標記（2）帶有入噬菌體的粘性末端（cos區(qū)）；（3）具有一個或多個限制酶的酶切位點；（4）其本身分子量小，容納40kb左右的DNA片段；（5）由于非重組粘性質粒很小，不能在體外包裝，因而體外包裝的主要是重組體，有利于以后的篩選。4040M31M31噬

17、菌體的優(yōu)點：噬菌體的優(yōu)點：（1）噬菌體顆粒中所含有的是單鏈DNA，該單鏈DNA可作為模板用于DNA序列分析；（2）利用單鏈M13克隆可制備成單鏈DNA探針用于雜交分析，檢測DNA或RNA，或者作為基因定點誘變的載體。4141大腸桿菌與哺乳動物表達載體的不同：大腸桿菌與哺乳動物表達載體的不同：大腸桿菌：含有復制位點、抗性基因、克隆位點，可導入大腸桿菌，與克隆載體一樣，表達載體中含有表達系統(tǒng)元件，即啟動子核糖體結合位點克隆位點轉錄終止信號。

18、哺乳動物：真核表達載體中含有一套真核表達元件：；啟動子增強子克隆位點終止信號和加poly(A)信號。4242重組重組DNADNA的目的和基本過程：的目的和基本過程：目的：（1）克隆某個特定的基因；（2）建立基因文庫、cDNA文庫，（3）將特定的基因片段進行亞克隆以進行DNA序列測定；（4）構建表達載體以便在特定的宿主細胞中表達某個基因。過程：（1）制備目的基因和相關載體（2）將目的基因和有關載體進行連接（3）將重組的DNA導入受體細胞（