水稻花粉特異性基因OsPSG076的表達(dá)分析、載體構(gòu)建及其遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、水稻(Oryza sativa L.)既是世界上第二大糧食作物，又是單子葉模式植物，水稻基因組測(cè)序計(jì)劃的完成為重要農(nóng)藝性狀相關(guān)基因的克隆與功能奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　花粉是開花植物的雄性配子體，其正常的發(fā)育對(duì)植物完成有性生殖過程至關(guān)重要。但是，目前有關(guān)花粉發(fā)育的分子調(diào)控機(jī)制還不是很清楚。本論文在實(shí)驗(yàn)室前期從水稻中克隆到的一個(gè)與小麥花粉特異性基因PSG076的同源序列OsPSG076的基礎(chǔ)上，采用RT-PCR技術(shù)分析OsPSG076

2、在水稻日本晴品種不同組織中的表達(dá)模式；采用洋蔥表皮細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)技術(shù)，分析了OsPSG076-GFP融合蛋白的亞細(xì)胞定位；最后構(gòu)建了OsPSG076基因過表達(dá)和RNAi表達(dá)載體，完成了水稻的遺傳轉(zhuǎn)化。主要研究結(jié)果如下：
　　(1)提取水稻不同組織中總RNA，采用半定量RT-PCR技術(shù)，分析了OsPSG076在水稻不同組織中的組織表達(dá)模式，發(fā)現(xiàn)OsPSG076基因主要在水稻花藥/花粉中高水平表達(dá)，在根中有微量的表達(dá)，而在其它組織中檢測(cè)

3、不到OsPSG076的表達(dá)。
　　(2)構(gòu)建了OsPSG076-GFP融合蛋白真核表達(dá)載體pBI121-OsPSG076-GFP，利用基因槍轉(zhuǎn)化技術(shù)將成功構(gòu)建的pBI121-OsPSG076-GFP導(dǎo)入洋蔥表皮細(xì)胞中，顯微觀察結(jié)果表明，與對(duì)照GFP一樣，OsPSG076-GFP融合蛋白分布在整個(gè)細(xì)胞中。
　　(3)分別成功構(gòu)建了OsPSG076的過表達(dá)載體pCAMBIA1304-OsPSG076-OX和RNAi干擾載體pCA