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1、為了構(gòu)建具有自主知識產(chǎn)權(quán)的山羊乳腺特異性表達載體,利用高保真聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)從中國奶山羊基因組中擴增出6個β-乳球蛋白(BLG)基因片段和1個β-酪蛋白(β-casein)基因片段.序列測定結(jié)果證明,所獲基因片段的DNA序列與已發(fā)表的山羊及綿羊相應(yīng)基因區(qū)域具有很高的同源性,5-端調(diào)控區(qū)中主要的乳腺特異表達調(diào)控元件完全相同,不僅說明此兩個基因在山羊、奶山羊和綿羊之間是高度保守的,而且說明所用的DNA聚合酶具有很高的保真性,所擴增的
2、基因片段可用于乳腺特異表達載體的構(gòu)建.將上述基因片段進行組合,構(gòu)建成一系列乳腺特異性表達載體.將lacZ報告基因分別克隆入自行構(gòu)建的p205C3載體和從國外引進的pCX及pHC載體,將所獲得的重組載體分別用脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染奶山羊乳腺上皮細胞系,經(jīng)泌乳激素誘導(dǎo)后用X-gal進行酶組化染色,結(jié)果表明自行構(gòu)建的載體驅(qū)動報告基因的表達水平高于從國外引進的、已知具有高表達性能的載體.上述重組載體在COS—1細胞和山羊皮膚成纖維細胞不能表達相應(yīng)的報
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