肝素質(zhì)量控制及新型酶法制備低分子量肝素研究.pdf

1、肝素和硫酸乙酰肝素是由糖醛酸-(1→4)-D-氨基葡萄糖的重復(fù)二糖單元組成的線性多糖。組成肝素和硫酸乙酰肝素的二糖結(jié)構(gòu)單元有N-硫酸基、O-硫酸基以及N-乙酰基等多種衍生結(jié)構(gòu),這些結(jié)構(gòu)單元在糖鏈中的連接順序千變?nèi)f化,因而形成了極其復(fù)雜的糖鏈一級結(jié)構(gòu)。肝素在1916年被發(fā)現(xiàn)并于1935年開始在臨床上作為抗凝劑使用至今。肝素是僅次于胰島素的使用最廣泛的天然藥物。我國是肝素原料藥生產(chǎn)大國,產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的一半以上。2008年上半年在美國發(fā)生

2、的肝素鈉污染事件導(dǎo)致一百多人死亡,這個事故重新引起了人們對肝素結(jié)構(gòu)研究和質(zhì)量控制的重視。
　　 本論文分四個章節(jié),分別從肝素的結(jié)構(gòu)、肝素酶的性質(zhì)、肝素酶對肝素的降解以及新型低分子量肝素的制備等四個方面來闡述肝素及肝素酶的特點和性質(zhì)。
　　 肝素的結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜,目前還不能直接對肝素這樣大的復(fù)雜多糖分子直接進(jìn)行研究。本課題通過將肝素降解成分子量從小到大的不同糖鏈長度的肝素寡糖的形式來研究肝素的結(jié)構(gòu)和序列,并討論了肝素酶l在降

3、解肝素時所表現(xiàn)的相關(guān)性質(zhì)。
　　 對于肝素酶的研究已經(jīng)很多。本論文在前人研究的基礎(chǔ)上,繼續(xù)對肝素酶的選擇性和降解的類型進(jìn)行深入仔細(xì)地研究。大部分的實驗結(jié)果與已經(jīng)報道的相同或者相近。研究還發(fā)現(xiàn),肝素酶1和肝素酶2顯示出對底物相同的降解類型,均為底物依賴性的以外切方式為主的降解酶。除此以外,還發(fā)現(xiàn)了肝素酶3新的選擇性降解的特點,即對某一種糖苷鍵的選擇性降解跟糖苷鍵在糖鏈中的位置有關(guān)。
　　 本論文的工作重點之一是應(yīng)用三種肝素

4、酶降解7種不同來源的藥用肝素產(chǎn)品并用自制的肝素寡糖標(biāo)準(zhǔn)品對這些降解的肝素寡糖混合物進(jìn)行定性和定量的研究,比較了各個肝素樣品之間在酶解以后的區(qū)別,定性定量地分析了肝素寡糖的成分。用酶法降解肝素并對寡糖進(jìn)行成分分析的方法為肝素質(zhì)量控制的新方法,可以用來檢測肝素的結(jié)構(gòu)和部分的序列。
　　 以多種不同結(jié)構(gòu)和分子鏈長度的肝素寡糖為底物,對肝素酶降解的選擇性和水解類型進(jìn)行了深入地研究,發(fā)現(xiàn)肝素酶3不但可以部分降解肝素成低分子量肝素,而且不會