豬與牛來源肝素制備低分子肝素的比較研究.pdf

1、20世紀末，歐洲地區(qū)暴發(fā)“瘋牛病”(Bovine spongiform encephalopathy, BSE)導(dǎo)致大部分國家藥典規(guī)定禁止使用牛來源肝素生產(chǎn)肝素類藥物。就目前臨床藥用肝素類藥物而言，其原料種屬來源僅依賴于豬，并且中國是世界上養(yǎng)豬數(shù)量最多的國家，其肝素原料產(chǎn)量約占全球的60％，這種單一的動物種屬來源與原料來源的不均衡已構(gòu)成肝素類藥物市場不穩(wěn)定的最大潛在因素。肝素藥物在臨床治療過程中會產(chǎn)生一些副作用，后來發(fā)現(xiàn)其經(jīng)降解制備得到

2、的低分子量肝素(Lowmolecular weight heparin，LMWH)臨床治療副作用小且抗凝血效果更好。目前LMWH已成為抗血栓臨床治療最主要的藥物，其中依諾肝素鈉是應(yīng)用最廣的一種LMWH。另一方面，“瘋牛病”的發(fā)病機理已被研究確認以及其擴散也得到有效控制。據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織(United Nations Food and Agriculture Organization，UNFAO)報告顯示，世界范圍內(nèi)牛的數(shù)量比豬的數(shù)量高約

3、70％，且主要分布于南美與南亞，恰好與豬的地理分布形成互補。種種因素均促使牛成為LMWH新物種來源的首選。
　　本論文中采用豬腸和牛肺來源肝素作為原料，主要通過調(diào)節(jié)肝素芐基酯堿解的時間、溫度與加堿量等工藝參數(shù)分別制備依諾肝素鈉，直至滿足美國藥典(United States Pharmacopeia，USP)對依諾肝素鈉分子量分布和1,6-內(nèi)醚含量的要求。然后應(yīng)用高效液相色譜法(High performance liquid chr

4、omatography,HPLC)、液質(zhì)聯(lián)用法(Liquid chromatography-Mass spectrometry, LC-MS)、核磁共振波譜法(Nuclear magnetic resonance，NMR)等分析技術(shù)表征對比USP依諾肝素鈉標(biāo)準品與實驗室制備的豬腸和牛肺來源依諾肝素鈉的結(jié)構(gòu)與活性的差異。該實驗首次實現(xiàn)了對牛肺來源依諾肝素鈉的糖鏈組成成分定性和定量分析。通過牛肺來源的依諾肝素鈉與USP標(biāo)準品的比較分析，可評