鞘內羅哌卡因伍用右美托咪定通過抑制脊髓神經元和星形膠質細胞活化協(xié)同調控慢性炎性痛大鼠的痛覺過敏.pdf

1、背景：慢性疼痛是長期困擾人類的頑疾，嚴重影響患者的生活質量。神經阻滯技術用于治療某些頑固性疼痛，如幻肢痛、帶狀皰疹后神經痛及復雜區(qū)域疼痛綜合征等效果顯著。隨著局麻藥更新?lián)Q代，左旋布比卡因、羅哌卡因（rop ivacaine,Ropi）等低毒高效的局麻藥相繼應用于臨床，但高濃度局麻藥在產生強效鎮(zhèn)痛的同時所造成的運動阻滯也給患者日常生活造成不便。雖然低濃度羅哌卡因具有“感覺—運動分離阻滯”的特性，但低濃度較大劑量的單獨用藥，隨之增加神經并發(fā)

2、癥也倍受關注。因此，現代疼痛治療多采用聯(lián)合用藥的策略，以兩種或兩種以上藥物相互作用（協(xié)同或疊加）為基礎，以減少用藥劑量，達到更好地鎮(zhèn)痛效應，并減少相關并發(fā)癥。前期研究表明，右美托咪定（dexmedetomidine,Dex）其可有效延長術后鞘內鎮(zhèn)痛的時間，且并未觀察到神經并發(fā)癥和其他不良反應的發(fā)生，提示鞘內應用右美托咪定可能與局麻藥產生一定協(xié)同或疊加效應，但作用機理近乎空白，亟需開展研究。我們的前期研究表明，神經元—星形膠質細胞相互作用

3、是參與慢性炎性痛維持和發(fā)展的重要環(huán)節(jié)，故本研究擬在大鼠神經慢性炎性痛模型上，綜合應用超微結構形態(tài)學、計算機三維重塑、分子生物學、神經藥理學、行為學等實驗手段以及等輻射分析（isobolographic analysis）等統(tǒng)計學方法，研究鞘內羅哌卡因伍用右美托咪定的相互作用，及其對神經元-星形膠質細胞的調控在慢性炎性痛中的作用。
　　目的：觀察鞘內Ropi伍用Dex對CFA誘導的慢性炎性痛大鼠輻射熱痛敏的相互作用，并探討其機制。<

4、br>　　方法：（1）大鼠足掌中部皮下注射完全福氏佐劑（complete Freund adjuvant,CFA）建立慢性炎性痛模型；
　　（2）運用Hargreaves熱輻射法檢測 CFA足底注射后熱縮足潛伏期（paw withdrawal latencies,PWLs）的動態(tài)變化；
　　（3）免疫熒光組織化學染色檢測脊髓背角神經元Fos及計算機三維重塑技術檢測星形膠質細胞膠質纖維酸性蛋白（glial fibrillary

5、 acidic protein,GFAP）表達的動態(tài)變化；
　　（4）Western Blot檢測足底注射CFA后星形膠質細胞GFAP的表達變化；
　?。?）大鼠鞘內置管分別給予不同劑量Ropi或Dex；
　?。?）運用Hargreaves熱輻射法檢測給予不同劑量Ropi或Dex后大鼠PWLs的動態(tài)變化；
　　（7）分別建立鞘內Ropi或Dex的量效曲線，并計算50％抗熱痛有效劑量（50% effective d

6、ose,ED50）；
　　（8）根據RopiED50和DexED50計算Ropi&DexED50add，并確定鞘內聯(lián)合給予Ropi&Dex的藥物劑量（藥物聯(lián)用后理論抑制熱痛10%、20%、40%、80%的劑量，即Dex&Ropi:ED50add*1/10,ED50add*2/10,ED50add*4/10和ED50add*8/10）；
　　（9）大鼠鞘內置管給予不同劑量Ropi&Dex；
　?。?0）運用 Hargre

7、aves熱輻射法檢測給予不同劑量Ropi&Dex后大鼠PWLs的動態(tài)變化；
　?。?1）建立鞘內Ropi&Dex的量效曲線，等輻射分析計算實際聯(lián)合用藥ED50，即ED50comb；
　?。?2）大鼠鞘內置管分別連續(xù)給予RopiED50、DexED50或Ropi&DexED50comb；
　?。?3）免疫熒光組織化學染色檢測給藥后脊髓背角神經元Fos及計算機三維重塑技術檢測給藥后星形膠質細胞GFAP表達的動態(tài)變化；

8、>　?。?4）Western Blot檢測給藥后星形膠質細胞GFAP的表達變化；
　?。?5）反復給藥，觀察鞘內給予最大劑量Ropi&Dex的鎮(zhèn)痛效應；
　?。?6）曠場實驗（open field,OF）檢測各最高劑量組大鼠自發(fā)活動和情緒變化；
　　（17）轉棒實驗檢測各最高劑量組大鼠運動協(xié)調能力；
　?。?8）蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin,HE）染色檢測各最高劑量組大鼠脊髓組織病理學變化。<

9、br>　　結果：（1）大鼠足掌中部皮下注射CFA可使注射側足產生顯著的持續(xù)性疼痛，表現為輻射熱痛閾的下降；
　?。?）脊髓背角神經元在CFA注射后2 h~1 d即達活化高峰，隨后下降，并持續(xù)至CFA注射后7 d，表現為Fos陽性神經元數目的增加；
　?。?）脊髓背角星形膠質細胞在CFA注射后3 d開始活化，7 d達活化高峰，表現為GFAP蛋白表達的增多；
　?。?）鞘內單次分別給予Ropi或Dex均具有劑量依賴性的鎮(zhèn)痛

10、效應，表現為輻射熱痛閾的上升；
　?。?）鞘內RopiED50為13.85μg/200 g，DexED50為1.65μg/200 g；
　?。?）鞘內Ropi&DexED50add=0.83 Dex+6.93 Ropi，Ropi&DexED50comb=0.63 Dex+5.26 Ropi。等輻射分析結果提示，鞘內聯(lián)合給予Ropi&Dex具有協(xié)同效應，表現為鎮(zhèn)痛程度增強、鎮(zhèn)痛時間延長，并呈劑量依賴性變化；
　?。?）鞘

11、內分別連續(xù)注射Ropi或Dex均可抑制CFA誘導的慢性炎性痛狀態(tài)下脊髓背角神經元的活化，尤其在2 h~1 d，聯(lián)合給藥具有協(xié)同抑制效應，表現為Fos陽性神經元數目的減少；
　　（8）鞘內分別連續(xù)注射Ropi或Dex均可抑制CFA誘導的慢性炎性痛狀態(tài)下脊髓背角星形膠質細胞的活化，尤其在5~7 d，聯(lián)合給藥具有協(xié)同抑制效應，表現為GFAP蛋白表達的減少；
　?。?）反復鞘內給予最大劑量Ropi&Dex不產生痛覺敏化或藥物耐受；<

12、br>　?。?0）OF實驗表明，鞘內置管和鞘內各最高劑量給藥對大鼠自發(fā)活動和情緒變化均無顯著影響，表現為與對照組相比，平均速度和中央活動時間百分比無顯著降低；
　?。?1）轉棒實驗表明，鞘內置管和鞘內各最高劑量給藥對大鼠運動協(xié)調能力均無顯著影響，表現為與對照組相比，置管/給藥前后棒上停留時間百分比無顯著降低；
　?。?2）鞘內注射Ropi在24 h可引起神經元周圍明顯的炎癥細胞浸潤，伍用Dex可減輕24 h內的炎癥細胞浸潤，

13、在給藥7 d后神經元周圍炎癥細胞浸潤無明顯差異。
　　結論：（1）足掌中部皮下注射CFA可產生顯著的輻射熱痛敏，且同側脊髓背角Fos和GFAP呈時間依賴性變化，提示神經元—星形膠質細胞的相互作用與CFA誘導的慢性炎性痛密切相關；
　?。?）鞘內分別給予Ropi和Dex均可阻斷脊髓神經元和星形膠質細胞的活化而緩解疼痛，且Ropi&Dex呈對輻射熱痛敏的緩解和脊髓神經元和星形膠質細胞活化的抑制呈協(xié)同作用，提示抑制脊髓神經元—星形