酒精對間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1-2生物學(xué)特性和心肌樣細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的:
　　 酒精對心臟發(fā)育的致畸作用已經(jīng)明確，但機(jī)制尚不清楚，心臟的發(fā)生和早期發(fā)育是一個(gè)起源于干細(xì)胞的極其復(fù)雜的增殖和多因子誘導(dǎo)分化調(diào)控過程，本研究以間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2為研究對象，通過體外培養(yǎng)過程中酒精的干預(yù)，觀察其對C3H10T1/2生物學(xué)特性及向心肌樣細(xì)胞分化的影響，從細(xì)胞增殖及分化能力方面探討酒精致畸的可能機(jī)制。
　　 方法:
　　 應(yīng)用MTT比色法觀察酒精對間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2的毒

2、性作用并篩選出低、高濃度干預(yù)組，在不同培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)檢測細(xì)胞吸光值并繪制生長曲線;不同濃度酒精干預(yù)48h后應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期的變化，應(yīng)用Q-PCR和Western blot方法檢測各組干細(xì)胞表面標(biāo)志Oct-4的表達(dá)水平變化。
　　 研究酒精干預(yù)后對C3H10T1/2向心肌樣細(xì)胞分化的影響時(shí)，分為四個(gè)實(shí)驗(yàn)組:BMP2誘導(dǎo)組，酒精+BMP2誘導(dǎo)組，C3H10T1/2組和陽性對照組，誘導(dǎo)后1、2、3、4周4個(gè)時(shí)間點(diǎn)應(yīng)用Q-PCR檢

3、測心臟發(fā)育相關(guān)基因GATA4、MEF2C的表達(dá)情況，Western blot檢測心肌特異性蛋白cTnT、Cx43的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1/2在37℃、5％ CO2的細(xì)胞培養(yǎng)孵箱中生長狀態(tài)良好，增殖速度快，2-3d可傳代。MTT篩選出50mM、100mM、200mM濃度的酒精作為干預(yù)濃度，50mM酒精對細(xì)胞增殖未產(chǎn)生顯著影響(P＞0.05)，200mM酒精對細(xì)胞抑制率為20％左右(P＜0

4、.05)。各組間細(xì)胞周期未見顯著差異(P＞0.05)，但與空白組相比，200mM酒精組細(xì)胞處于G2期比例有下降趨勢、處于S期比例則有增加的趨勢，G2/G1較空白組增大。各組間干細(xì)胞表面標(biāo)志Oct-4的表達(dá)在基因及蛋白水平均無顯著差異(P＞0.05)。
　　 C3H10T1/2細(xì)胞加入BMP2誘導(dǎo)后細(xì)胞折光性增強(qiáng)，呈梭形，細(xì)胞間連接緊密且排列趨向一致。BMP2誘導(dǎo)組和酒精+BMP2誘導(dǎo)組GATA4的表達(dá)在誘導(dǎo)的第1周開始升高，第2

5、周達(dá)高峰，MEF2C的表達(dá)在第2周升高，第3、4周達(dá)高峰，兩組間無顯著差異(P＞0.05)，但表達(dá)量仍明顯低于陽性對照組(P＜0.05)，而空白組為持續(xù)低表達(dá)量。BMP2誘導(dǎo)組和酒精+BMP2誘導(dǎo)組在誘導(dǎo)的第3周出現(xiàn)cTnT、Cx43的表達(dá)，兩組間無顯著差異(P＞0.05)，但仍低于陽性對照組(P＜0.05)，空白組未見相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)論:
　　 酒精抑制C3H10T1/2細(xì)胞的增殖，且抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性;