紅茶和綠茶多酚與人唾液α-淀粉酶相互作用的酶促動(dòng)力學(xué)和熒光猝滅研究.pdf

1、目的：本研究旨在通過紅/綠茶多酚(teapolyphenols，TP)對(duì)人唾液α-淀粉酶(humansalivaryα-amylase，HSA)的酶促動(dòng)力學(xué)和熒光猝滅實(shí)驗(yàn)，從HSA活性的改變和分子結(jié)構(gòu)的變化考察紅/綠茶TP與HSA相互作用的效果和特異性，從而為解釋紅/綠茶TP對(duì)口腔感覺的收斂性作用和口腔中茶源性色素沉著的生理意義奠定理論基礎(chǔ)。
　　 方法：在無抑制劑和紅/綠茶TP抑制劑下，用540 nm的不間斷波長(zhǎng)檢測(cè)HSA催化

2、水解淀粉生成麥芽糖的吸光度，從而計(jì)算出反應(yīng)速度，由Lineweaver-Burk圖求出動(dòng)力學(xué)參數(shù)：最大反應(yīng)速度(Vmax)、酶-底物解離常數(shù)(Ks)和酶-抑制劑解離常數(shù)(Ki)。統(tǒng)計(jì)分析參數(shù)間的差異并確定抑制類型。在285 nm(λex)的激發(fā)波長(zhǎng)下，加入不同濃度的紅/綠茶TP溶液，觀察HSA的熒光強(qiáng)度變化。通過作出的熒光光譜圖計(jì)算Stem-Volmer猝滅常數(shù)(KSV)、雙分子猝滅常數(shù)(kq)、靜態(tài)猝滅常數(shù)(KS)、表觀靜態(tài)猝滅結(jié)合常

3、數(shù)(KA)和表觀靜態(tài)猝滅常數(shù)(K)以及其他熒光猝滅相關(guān)的參數(shù)，判斷紅/綠茶TP對(duì)HSA的熒光猝滅類型，統(tǒng)計(jì)分析紅茶和綠茶間熒光猝滅參數(shù)的差異。
　　 結(jié)果：紅/綠茶與無抑制劑Vmax之間的差異和綠茶抑制劑與無抑制劑Ks之間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，紅茶TP對(duì)HSA的抑制為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制型，綠茶TP對(duì)HSA的抑制為反競(jìng)爭(zhēng)性抑制型；紅茶抑制劑Ks大于綠茶(P＜0.05)；而紅茶抑制劑Ki小于綠茶(P＜0.05)。熒光猝滅

4、中紅/綠茶TP的kq大于雙分子擴(kuò)散限制性猝滅常數(shù)值(1×1010M-1s-1)，且伴隨紅/綠茶TP溶液濃度增加，熒光發(fā)射波長(zhǎng)(λem)發(fā)生藍(lán)移，綠茶的藍(lán)移效果(18 nm)比紅茶(5 nm)強(qiáng)；紅茶為靜態(tài)猝滅，綠茶是以靜態(tài)猝滅為主的動(dòng)靜態(tài)聯(lián)合猝滅；紅/綠茶TP分子與HSA分子上一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)相結(jié)合(n=1)。紅茶和綠茶之間的熒光猝滅參數(shù)KS、KA和K均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異；紅茶猝滅劑的KS和K均大于綠茶(P＜0.05)，而紅茶猝滅劑的KA小于