微小RNA-10b沉默對(duì)人三陰性乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及機(jī)制研究.pdf

1、背景：miRNAs是一類小分子內(nèi)源性單鏈非編碼RNA，它通過(guò)與靶mRNA完全或不完全的互補(bǔ)結(jié)合，從而促進(jìn)靶mRNA降解或抑制轉(zhuǎn)錄后基因的表達(dá)，而發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)作用。微小RNA-10b（miR-10b）作為miRNAs家族中的一員，參與多種腫瘤的生物學(xué)過(guò)程，其在乳腺癌中的生物學(xué)特性一直備受爭(zhēng)議。人三陰性乳腺癌是指雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）及表皮生長(zhǎng)因子受體2（Her-2）均表達(dá)缺失的乳腺癌，具有高侵襲性、組織學(xué)分級(jí)較高、預(yù)后

2、較差和靶向治療無(wú)效等特點(diǎn)。為明確miR-10b在人三陰性乳腺癌細(xì)胞中的生物學(xué)特性，本研究選取具有人三陰性乳腺癌特性的MDA-MB-231細(xì)胞為標(biāo)本，探討miR-10b沉默對(duì)其增殖、凋亡、侵襲和遷移及靶基因TIAM1表達(dá)的影響。
　　目的：探討miR-10b沉默對(duì)人三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，并探討其對(duì)靶基因TIAM1表達(dá)的影響。
　　方法：1、用人工合成的miR-10b inhibitor瞬時(shí)轉(zhuǎn)染M

3、DA-MB-231細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組（IN組），同時(shí)設(shè)空白細(xì)胞組（Cell組）為空白對(duì)照，無(wú)義序列轉(zhuǎn)染組（NC組）為陰性對(duì)照。轉(zhuǎn)染48h后，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）檢測(cè)各組細(xì)胞miR-10b的表達(dá)，以檢測(cè)沉默效果。
　　2、CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)分析轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和遷移能力變化。
　　3、Real-time PCR和Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后各

4、組細(xì)胞TIAM1 mRNA和蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、Real-time PCR結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染miR-10b inhibitor后，與對(duì)照組相比，miR-10b的相對(duì)表達(dá)量明顯下調(diào)，表明成功沉默miR-10b的表達(dá)。
　　2、CCK-8法檢測(cè)結(jié)果表明：miR-10b沉默后，48h和72h增殖率均明顯上調(diào)（P<0.01），增殖效應(yīng)在48h之后出現(xiàn)，并一直維持到72h。
　　3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明：miR-10b沉默

5、后，早期和晚期細(xì)胞凋亡比例分別1.77％和1.61%，均明顯下調(diào)（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4、Transwell侵襲和遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：轉(zhuǎn)染48h后，穿過(guò)基質(zhì)膜的侵襲和遷移細(xì)胞數(shù)分別為（212.17±13.57）個(gè)和（322.67±8.62）個(gè)，均明顯上調(diào)（P<0.01）。
　　5、Real-time PCR和Western blot法結(jié)果顯示：TIAM1基因在mRNA水平變化不大（P>0.05），在蛋白水平