單分子力譜研究核酸適配體與Bel-7404細胞的相互作用.pdf

1、作為一種新型的能以癌細胞為靶標的識別分子，核酸適配體因其具有高特異性、高親和力等優(yōu)點已在生物傳感、診療等研究領(lǐng)域引起了關(guān)注。在這些研究中，核酸適配體通常需要被固定到一個表面上。為了確保固定化的核酸適配體探針對靶細胞的高特異性、高親和力，核酸適配體的固定化方法起著至關(guān)重要的作用。因此，有必要在活細胞水平上研究不同的固定化方法對核酸適配體與靶細胞相互作用的影響。本論文選取人肝癌細胞株Bel-7404為例，利用單分子力譜較為系統(tǒng)地研究了核酸適

2、配體的固定化方法對Bel-7404細胞與其核酸適配體ls2n相互作用的影響,并進一步考察了重金屬離子對二者相互作用的影響。內(nèi)容包括：
　　1．利用單分子力譜研究了核酸適配體的不同固定化方法對Bel-7404細胞與其核酸適配體ls2n相互作用的影響。在近生理條件下，系統(tǒng)地考察了核酸適配體的不同修飾末端（3’端或5’端）、不同延長手臂（T手臂或碳鏈手臂）、不同交聯(lián)劑的選擇（PEG或戊二醛作為交聯(lián)劑）對核酸適配體與Bel-7404細胞相

3、互作用的影響。結(jié)果表明：(1)與核酸適配體的3’端作為修飾末端相比，核酸適配體的5’端作為修飾末端時核酸適配體與Bel-7404細胞相互作用的結(jié)合幾率更高，說明5’端作為修飾末端更有利于核酸適配體與Bel-7404細胞結(jié)合；（2）與未延長手臂相比，延長T堿基作為手臂均能明顯提高核酸適配體對Bel-7404細胞的識別能力。但是延長碳鏈作為手臂時，僅能略微提高以戊二醛作為交聯(lián)劑時的核酸適配體與 Bel-7404細胞相互作用的結(jié)合幾率，而對以

4、 PEG作為交聯(lián)劑時的二者相互作用的結(jié)合幾率幾乎沒有影響，因此 T手臂比碳鏈手臂更有效；（3）與以戊二醛為交聯(lián)劑時相比，以 PEG作為交聯(lián)劑時核酸適配體與 Bel-7404細胞相互作用的結(jié)合幾率更高。因此，PEG修飾方法比戊二醛修飾方法更優(yōu)。該研究將為基于核酸適配體的化學生物傳感設(shè)計提供重要參考。
　　2．利用單分子力譜研究了重金屬離子Cd2+、Hg2+對核酸適配體ls2n與Bel-7404細胞相互作用的影響。當 Bel-7404

5、細胞經(jīng)不同濃度的Cd2+或 Hg2+處理后，考察了核酸適配體與Bel-7404細胞的相互作用情況。結(jié)果表明，隨著Cd2+、Hg2+濃度的增大，核酸適配體與Bel-7404細胞的結(jié)合幾率明顯下降，但是核酸適配體與細胞的相互作用力增大。這可能是Cd2+、Hg2+影響了Bel-7404細胞的正常生理代謝，進而影響了Bel-7404細胞上的核酸適配體相應(yīng)靶標的正常表達；或者是Cd2+、Hg2+引起了Bel-7404細胞的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變所致。該研