兩種罕見(jiàn)角膜基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良的臨床病理特征和分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、目的:觀察膠樣滴狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良和施奈德角膜營(yíng)養(yǎng)不良這兩種罕見(jiàn)的角膜基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良的臨床表現(xiàn),研究患者角膜組織病理學(xué)及活體角膜共焦顯微鏡和眼前節(jié)光學(xué)斷層掃描的圖像特征,同時(shí)分析膠樣滴狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良致病基因TACSTD2基因和施奈德角膜營(yíng)養(yǎng)不良致病基因UBIAD1基因的突變情況,研究這兩種角膜基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)不良的分子遺傳學(xué)機(jī)制。
　　 方法：收集獨(dú)立的膠樣滴狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良家系3個(gè)和施奈德角膜營(yíng)養(yǎng)不良家系1個(gè),對(duì)4個(gè)家系中的4例角膜營(yíng)養(yǎng)不良患

2、者行以新鮮角膜作為供體的深板層角膜移植術(shù),將患者病變角膜組織做病理組織學(xué)、透射及掃描電鏡檢查,并在術(shù)前對(duì)患者角膜分別進(jìn)行裂隙燈拍照、活體共焦顯微鏡和眼前節(jié)光學(xué)相干斷層掃描,同時(shí)從患病者及其家系成員的外周靜脈血中提取基因組DNA,用特異性引物分別將致病基因TACSTD2和UBIAD1基因行PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物純化后進(jìn)行雙向測(cè)序,設(shè)50例正常人作為對(duì)照,分析患者基因型的改變。
　　 結(jié)果：膠樣滴狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良患者角膜表面可以見(jiàn)到呈

3、半球形隆起的灰白色膠滴狀結(jié)節(jié)；病變角膜片在剛果紅染色下顯示特征性的角膜上皮下紅染的淀粉樣物質(zhì)沉積,累及前部角膜基質(zhì),角膜上皮基底膜和前彈力層結(jié)構(gòu)消失；掃描電鏡下可見(jiàn)角膜表層上皮細(xì)胞之間間隙增大,透射電鏡下可見(jiàn)角膜上皮基底細(xì)胞的基底面出現(xiàn)大量釘突狀突起結(jié)構(gòu)并向下插入其下的淀粉樣沉積物中,沉積物的超微結(jié)構(gòu)呈典型的淀粉樣纖維外觀；活體共焦顯微鏡檢查見(jiàn)患者角膜表層上皮細(xì)胞間連接異常,細(xì)胞間有較大間隙,上皮基底細(xì)胞層次不清、胞體腫脹,上皮基底細(xì)胞

4、層下可見(jiàn)無(wú)定形的高反光物質(zhì)沉積,累及前部基質(zhì)；在眼前節(jié)光學(xué)相干斷層掃描圖像上,患者的角膜病變主要位于上皮細(xì)胞層和前部基質(zhì),角膜表面凹凸不平,呈波浪樣,角膜基質(zhì)的膠原板層規(guī)則排列被破壞,基質(zhì)內(nèi)呈強(qiáng)弱不一致的回聲信號(hào)。施奈德角膜營(yíng)養(yǎng)不良結(jié)晶型患者右眼角膜中央?yún)^(qū)基質(zhì)層混濁,角膜上皮下有散在點(diǎn)狀結(jié)晶,左眼角膜中軸部的前基質(zhì)層內(nèi)有一環(huán)形或邊緣不規(guī)整的、略里盤狀的黃白色混濁,混濁由無(wú)數(shù)細(xì)小、針狀結(jié)晶組成；施奈德角膜營(yíng)養(yǎng)不良無(wú)結(jié)晶型患者可見(jiàn)雙眼角膜中

5、軸部可見(jiàn)一無(wú)結(jié)晶圓盤狀混濁；透射電鏡下可見(jiàn)角膜基質(zhì)淺層與Bowman層中有膽固醇結(jié)晶沉積；活體共焦顯微鏡檢查見(jiàn)結(jié)晶型患者角膜前彈力層及淺基質(zhì)層內(nèi)可見(jiàn)到大量點(diǎn)狀、散在分布的結(jié)晶物,無(wú)結(jié)晶型患者則未見(jiàn)到針狀或方形的膽固醇結(jié)晶物質(zhì)存在于角膜組織內(nèi)；在眼前節(jié)光學(xué)相干斷層掃描圖像上,施奈德角膜營(yíng)養(yǎng)不良患者的角膜病變主要位于前部基質(zhì),顯示為高信號(hào)強(qiáng)度的致密物質(zhì)。分子遺傳學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)3個(gè)膠樣滴狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良家系的患者TACSTD2基因分別出現(xiàn)c.52

6、6576del51、c.509C>A和c.356G>A突變。在患者中突變以純合子存在,在患者父母和其他未患病的親屬中以雜合子存在,50例正常對(duì)照者中未發(fā)現(xiàn)TACSTD2基因突變；施奈德角膜營(yíng)養(yǎng)不良家系的患者UBIAD1基因出現(xiàn)c.292 G>A突變,在患者中突變以雜合子存在,50例正常對(duì)照者中未發(fā)現(xiàn)UBIAD1基因突變。
　　 結(jié)論：膠樣滴狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良特征性的臨床表現(xiàn)是角膜表面顆粒狀隆起物伴基質(zhì)混濁,病理組織學(xué)特征是角膜上皮下

7、的淀粉樣物質(zhì)沉積；施奈德角膜營(yíng)養(yǎng)不良具有結(jié)晶型和非結(jié)晶型兩種臨床表現(xiàn),病理組織學(xué)特征是角膜基質(zhì)內(nèi)的膽固醇結(jié)晶物沉積；我們首次報(bào)道了膠樣滴狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良和施奈德角膜營(yíng)養(yǎng)不良的活體共焦顯微鏡及眼前節(jié)相干光學(xué)斷層掃描圖像特征,這兩種檢查可發(fā)現(xiàn)角膜營(yíng)養(yǎng)不良角膜內(nèi)異常物質(zhì)的沉積和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改變,在疾病的隨訪和手術(shù)療效評(píng)估中有重要意義；分子遺傳學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)膠樣滴狀角膜營(yíng)養(yǎng)不良和施奈德角膜營(yíng)養(yǎng)家系的患者分別呈現(xiàn)TACSTD2和UBIAD1基因突變,基