缺氧對卵巢癌細(xì)胞株SKOV3細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其相關(guān)機(jī)制.pdf

1、鍰旦次學(xué)博士學(xué)位論文缺氧對卵巢癌細(xì)胞株5KOV3細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其相關(guān)機(jī)制院寺蛙系幢名女f產(chǎn)科醫(yī)院鰣產(chǎn)科學(xué)高蜀君措導(dǎo)教師：王互亙墼壁完成日期：—三業(yè)生生』點(diǎn)止出體外培養(yǎng)SKOV3細(xì)胞，分別缺氧0、8、16、24h。采用RT—PCR檢測HIF一1a和Ecad的mRNA表達(dá)，westernblot檢測HIF一1Ⅱ和Ecad的蛋白表達(dá)，RT—PCR和RealtimePCR檢測SNAIL基因的mRNA表達(dá)，了解缺氧對SKOV3細(xì)胞Ecad

2、表達(dá)的影響。用HIF一1a抑制劑Rapamycin預(yù)處理細(xì)胞30分鐘后，并在缺氧處理后，檢測上述各指標(biāo)的變化，探討Ecad與HIF一1Q表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果：常規(guī)培養(yǎng)的SKOV3穩(wěn)定表達(dá)HIF一1Q和Ecadherin。缺氧使HIF一1o蛋白水平表達(dá)增加，于缺氧16h達(dá)到峰值，為對照組的62倍(P=O005)，并維持高表達(dá)；缺氧不同時(shí)間，HIF一1d的mRNA表達(dá)無明顯變化。Ecad的mRNA和蛋白均隨缺氧時(shí)間延長而表達(dá)下降，缺氧16和24

3、h其表達(dá)分別為對照組的48％(P=O002)和5％(P=00003)。Ecadherin的直接抑制因子SNAIL基因的mRNA表達(dá)則隨缺氧時(shí)間延長而逐漸增強(qiáng)，realtimePCR顯示常氧培養(yǎng)的SKOV3中SNAIL表達(dá)為13500107106，缺氧8h其表達(dá)為18310121106，缺氧16h為39780373x106，缺氧24h為5681O65106，較對照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Rapamycin可以抑制缺氧誘導(dǎo)的HIF一1Q和SN

4、AIL基因的表達(dá)增加，同時(shí)恢復(fù)缺氧情況下Ecadherin的表達(dá)。Rapamycin可以從蛋白水平抑制HIF一1Q表達(dá)，防止Ecad在缺氧環(huán)境中的降低。第三部分材料與方法：運(yùn)用HIF一1Q刺激劑cobaltchloride(CoCl：)作用于SKOV3細(xì)胞，以使HIF一1a過表達(dá)，檢測HIF一1Q過表達(dá)時(shí)，Rapamycin對SNAIL表達(dá)的影響，比較其HIF一1Ⅱ和SNAIL之間的作用關(guān)系。分別針對SKOV3細(xì)胞的HIF一1Ⅱ和SNA

5、IL基因進(jìn)行RNA干擾。設(shè)計(jì)針對HIF一1Ⅱ和SNAIL基因的SiRNA，轉(zhuǎn)染SKOV3細(xì)胞，RT—PCR檢測干擾后HIF—la和SNAIL基因mRNA表達(dá)，RealtimePCR檢測SNAIL基因mRNA表達(dá)，WesternBlot檢測HIF～1o的蛋白表達(dá)。進(jìn)一步明確兩者之間的相互關(guān)系。結(jié)果：利用CoCl。作用于SKOV3細(xì)胞，使HIF—la過表達(dá)，則Rapamycin失去對SNAIL基因的抑制作用。RNA干擾顯示，HIF一1d的S