鳥苷酸交換因子C3G對卵巢癌SKOV3細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的影響與機制探討.pdf

1、目的:在前期研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討鳥苷酸交換因子C3G在卵巢癌SKOV3細(xì)胞生長、凋亡、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為中的影響與機制。
　　方法:1.體外實驗:應(yīng)用Western blotting檢測C3G表達(dá)缺失的SKOV3細(xì)胞（SKOV3-C3Gi）及轉(zhuǎn)染陰性對照細(xì)胞（SKOV3-NT）中p38MAPK的表達(dá);AnnexinV/PI法檢測細(xì)胞凋亡，單細(xì)胞凝膠電泳實驗檢測單細(xì)胞DNA損傷;血管內(nèi)滲及外滲實驗檢測細(xì)胞侵襲能力。2.體內(nèi)實

2、驗:構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤模型及腹腔種植轉(zhuǎn)移模型，觀察腫瘤細(xì)胞異種成瘤及轉(zhuǎn)移情況，免疫組化法檢測皮下移植瘤組織中Ki67表達(dá);3.臨床標(biāo)本檢測:采用Western blotting檢測4例卵巢癌患者原發(fā)灶、網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移灶及腸表面轉(zhuǎn)移灶中C3G的表達(dá)。
　　結(jié)果:與SKOV3-NT細(xì)胞相比，SKOV3-C3Gi細(xì)胞中p38MAPK表達(dá)無顯著變化（0.5±0.09 vs.0.4±0.06，P＞0.05）;早期凋亡細(xì)胞比例（40.3％±8.8％

3、 vs.5.6％±1.5％，P＜0.05）及DNA損傷程度（尾部面積37.8±10.3 vs.10.8±3.6，P＜0.05）顯著增加;血管內(nèi)滲細(xì)胞數(shù)（14.8±5.1vs.52.7±8.0，P＜0.05）及外滲細(xì)胞數(shù)（8.3±2.1 vs.29.2±3.6，P＜0.05）顯著減少。應(yīng)用腫瘤細(xì)胞構(gòu)建裸鼠皮下移植瘤模型，種植30天后，SKOV3-C3Gi細(xì)胞移植瘤體積和質(zhì)量分別為0.30±0.11 cm3和0.27±0.10g，顯著低于S

4、KOV3-NT移植瘤（1.15±0.25cm3，P＜0.05和0.73±0.12g，P＜0.05）。兩種移植瘤組織中Ki67陽性率無顯著差異（75.8％±9.5％ vs.83.2％±12.7％，P＞0.05）。在腹腔種植模型中，腹腔注射腫瘤細(xì)胞5周后，SKOV3-C3Gi細(xì)胞在腹腔內(nèi)臟尤其是腸管上形成的種植轉(zhuǎn)移灶數(shù)目較SKOV3-NT細(xì)胞顯著減少（22.0±5.6 vs.59.2±2.7，P＜0.05）。4例同時有腸道轉(zhuǎn)移和網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移的卵

5、巢癌患者中，C3G在腸道轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)均顯著高于原發(fā)灶和網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移灶(P＜0.05)。其中1例卵巢癌患者腸道轉(zhuǎn)移灶中Rap1及Rap-GTP的表達(dá)也相應(yīng)地高于原發(fā)灶和網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移灶(P＜0.05)。
　　結(jié)論:在卵巢癌SKOV3細(xì)胞中下調(diào)C3G表達(dá)后，細(xì)胞增殖無顯著變化，細(xì)胞凋亡增加，細(xì)胞侵襲能力、異種移植皮下成瘤能力及在腸管種植轉(zhuǎn)移能力減弱;C3G及相關(guān)信號通路可能通過抑制細(xì)胞凋亡促進(jìn)卵巢癌SKOV3細(xì)胞和腫瘤生長，同時增強細(xì)胞侵襲能