2型糖尿病患者血清及糖負荷U-937細胞蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、目的:通過應用蛋白質(zhì)組學技術研究糖尿病患者血清及高糖負荷U-937細胞的蛋白變化情況，探尋變化蛋白與糖尿病發(fā)展的相互作用機制，并探討VD應用于糖尿病人群的分子作用機制，為糖尿病的人群防治提供科學依據(jù)。
　　方法:(1)人群實驗:隨機抽取青島市某綜合醫(yī)院2013年就診的10例2型糖尿病患者作為病例組，匹配選取該地同期正常健康人群10例作為對照組。兩組人群均采集清晨空腹血液，離心獲得上層血清進行雙向電泳實驗，選取差異蛋白質(zhì)點做質(zhì)譜(M

2、ALDI-TOF-MS)鑒定，并對差異蛋白質(zhì)進行Western Blot驗證。(2)細胞實驗:采用人白血病單核細胞株U-937，將細胞分為3組，空白對照組采用標準培養(yǎng)基進行正常培養(yǎng)，未進行任何干預;單純高糖組以D-葡萄糖終濃度為45 mmol/L的高糖培養(yǎng)基進行培養(yǎng);VD3干預高糖組則以VD。含量為1.6×10-4mmol/L標準培養(yǎng)基培養(yǎng)2h后，再加入D-葡萄糖終濃度為45 mmol/L的高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)。所有分組均在37℃、5％CO2

3、條件下培養(yǎng)48小時后裂解細胞收集總蛋白，實驗重復3次。不同批次的樣本在相同條件、不同時間下分別進行SDS-PAGE雙向電泳，選取差異蛋白點進行基質(zhì)輔助激光解析飛行時間的MALDI-TOF-MS鑒定，并對鑒定蛋白進行Western Blot驗證。
　　結(jié)果:(1)人群實驗中，病例組與對照組相比表達明顯差異的蛋白質(zhì)點有6個，MALDI-TOF-MS成功鑒定出4種蛋白質(zhì)分別為:叢生蛋白前體蛋白、C反應蛋白、抑制素、過氧化氫酶。(2)細胞

4、實驗中，空白對照組與單純高糖組比較表達差異的蛋白質(zhì)點有73個，維生素D干預高糖組與單純高糖組比較表達差異的蛋白質(zhì)點有66個，進一步比較發(fā)現(xiàn)單純高糖組表達變化趨勢與另兩組一致的蛋白質(zhì)點有30個。選取其中13個點進行質(zhì)譜鑒定，成功鑒定出13種蛋白質(zhì)，分別為:抑制素、T-復合蛋白、甘露糖-6-磷酸受體結(jié)合蛋白1、過氧化氫酶、蛋白二硫鍵異構酶、嘌呤核苷磷酸化酶、微管解聚蛋白、電子轉(zhuǎn)移黃素蛋白、延胡索先乙酰乙酸水解酶、70KD的熱休克蛋白質(zhì)8、肌

5、動蛋白、磷酸丙糖異構酶、線粒體ATP合酶亞基D。
　　結(jié)論:本研究應用雙向凝膠電泳和質(zhì)譜技術鑒定出了糖尿病患者血清表達變化的蛋白質(zhì)和VD對糖負荷U-937細胞產(chǎn)生作用的相關的差異蛋白質(zhì)，這些差異表達蛋白主要與細胞氧化應激和能量代謝有關，證明糖尿病患者體內(nèi)的高糖環(huán)境與炎癥反應密切相關，考慮VD可能通過降低氧化應激損傷和影響能量代謝的途徑調(diào)節(jié)高糖負荷產(chǎn)生的損傷;細胞實驗與人群實驗中，抑制素變化一致且有意義，因此可能是維生素D預防和治療