解毒化濁軟肝法對(duì)免疫性肝纖維化大鼠的防治作用及其機(jī)理初探.pdf

1、目的：我們?cè)谂R床實(shí)踐中，運(yùn)用解毒化濁軟肝法治療免疫性肝纖維化取得了良好的療效。本研究旨在通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，觀察以解毒化濁軟肝法立法的化纖V號(hào)方對(duì)免疫性肝纖維化大鼠組織病理學(xué)、血清學(xué)、免疫組化等指標(biāo)的影響，進(jìn)一步研究解毒化濁軟肝法對(duì)免疫性肝纖維化的防治作用及初步探討其作用機(jī)理，并由此理論對(duì)肝纖維化的病因病機(jī)及其防治做全面的闡述。 方法：本課題主要進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。1立論依據(jù)肝纖維化是由于各種因素引起肝臟損傷，使細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)生成增多

2、，ECM降解減低，二者失去平衡，最終形成纖維化。在我國(guó)，2/3的肝纖維化患者來(lái)自病毒性肝炎后肝纖維化，即免疫性肝纖維化。導(dǎo)師李佃貴教授通過(guò)多年臨床實(shí)踐認(rèn)為，肝炎病毒屬濁毒之邪，人體正氣虧虛、情志抑郁，濁毒之邪趁機(jī)侵犯肝經(jīng)，日久留戀不去，導(dǎo)致肝之氣機(jī)阻滯；氣滯則生濕成瘀，濕久再成濁，瘀久化熱又為毒，毒借濁質(zhì)，濁挾毒性，濁毒反復(fù)糾纏，膠結(jié)滯于脅下，疾病始生，而其病機(jī)關(guān)鍵在于濁毒內(nèi)滯。故以解毒化濁軟肝法立法恰切病機(jī)，在此法指導(dǎo)下，創(chuàng)化纖V號(hào)方

3、，在臨床上治療本類疾病，亦取得了良好效果。 2實(shí)驗(yàn)研究將SD大鼠隨機(jī)分為4組：A組為正常組，B組為模型組，C組為陽(yáng)性對(duì)照組，D組為防治組。采用離心后的豬血清給B、C、D各組大鼠腹腔注射，每只大鼠注射0.5ml，每周2次，持續(xù)時(shí)間為12周；C組同時(shí)灌服復(fù)方鱉甲軟肝片；D組同時(shí)灌服化纖V號(hào)方。實(shí)驗(yàn)同時(shí)觀察動(dòng)物的神態(tài)、外觀、活動(dòng)情況，稱量動(dòng)物體重。在實(shí)驗(yàn)第12周全部處死大鼠，取大鼠血清做肝功能指標(biāo)、肝纖維化指標(biāo)檢查，取大鼠肝組織做HE

4、染色、Mallory膠原染色、肝纖維化分級(jí)及TGF-β1的免疫組化。 結(jié)果：如下。l大鼠一般狀態(tài)的變化A組大鼠，活動(dòng)自如，被毛有光澤，精神狀態(tài)好，無(wú)異常狀態(tài)出現(xiàn)。B組大鼠被毛欠光華，活動(dòng)攝食均未見(jiàn)減少，精神狀態(tài)可，有的糞便變稀松。C組大鼠活動(dòng)尚可，被毛光澤稍差，精神狀態(tài)可。D組大鼠活動(dòng)正常，被毛光澤，精神狀態(tài)好，無(wú)異常狀態(tài)出現(xiàn)。各組大鼠體重不斷增長(zhǎng)，B、C、D組與A組大鼠比較無(wú)明顯變化(p＞0.05)。 2大鼠肝組織病理

5、變化A組大鼠肝組織肝小葉排列整齊，肝細(xì)胞核大而圓，位于中央，偶見(jiàn)雙核。Mallory染色顯示膠原纖維只在中央靜脈周圍、匯管區(qū)周圍有少量表達(dá)，含量極少。B組大鼠肝小葉被破壞，肝細(xì)胞變形多為水樣變性及氣球樣變性，胞質(zhì)疏松淡染，可見(jiàn)雙核細(xì)胞，中央靜脈及門(mén)管區(qū)周圍伴有中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。Mallory染色可見(jiàn)膠原纖維增生，把原肝小葉分割，形成無(wú)中央靜脈或多個(gè)中央靜脈的肝細(xì)胞團(tuán)。C組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)尚未恢復(fù)正常，肝細(xì)胞排列基本正常，未見(jiàn)到肝細(xì)

6、胞團(tuán)。肝細(xì)胞空泡樣變或氣球樣變較模型組減少，偶見(jiàn)雙核肝細(xì)胞。Mallory染色顯示膠原纖維沉積比B組減少，中央靜脈及匯管區(qū)仍有膠原纖維增生。D組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)基本正常，中央靜脈偏位不明顯；肝細(xì)胞核位于中央，胞質(zhì)豐富，偶見(jiàn)到雙核肝細(xì)胞；肝細(xì)胞氣球樣變、脂肪樣變等病理改變減輕；Mallory染色顯示中央靜脈及門(mén)管區(qū)的膠原纖維沉積比B組明顯減少，未形成假小葉。肝纖維化分級(jí)結(jié)果顯示：B組肝纖維化分級(jí)明顯高于A組，二者比較有顯著性差異(P＜0.0

7、5)；C、D組大鼠肝纖維化分級(jí)明顯低于B組(P＜0.05)；D組大鼠的肝纖維化分級(jí)低于C組，二者比較有顯著性差異(P＜0.05)。 3肝功能的變化B組大鼠肝功能指標(biāo)與A組比較明顯升高，有顯著性差異(P＜0.05)；C、D兩組肝功能指標(biāo)較B組明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05)。 4肝纖指標(biāo)的變化B組大鼠肝纖指標(biāo)與A組比較明顯升高(P＜0.05)；C、D兩組肝纖指標(biāo)較B組明顯降低(P＜0.05)，D組肝纖指標(biāo)與C組比較明

8、顯降低，有顯著性差異(p＜0.05)。 5TGF-βl蛋白表達(dá)的變化A組大鼠肝組織TGF-β1表達(dá)不明顯，主要表達(dá)于肝竇的Disse間隙中，在小葉中央靜脈周圍細(xì)胞及纖維間隔周圍也有少量表達(dá)。B組大鼠肝組織中央靜脈周圍、匯管區(qū)周圍、Disse間隙中及纖維間隔周圍均有陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞記數(shù)與正常組比較明顯增多，有顯著性差異(P＜0.05)。C組大鼠肝組織中央靜脈周圍、匯管區(qū)及纖維間隔周圍均有少量陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，但著色較模型組淺，

9、陽(yáng)性細(xì)胞記數(shù)與模型組比較明顯降低，有顯著性差異(P＜O.05)；D組大鼠肝組織在匯管區(qū)周圍、中央靜脈周圍及纖維間隔附近可見(jiàn)散在的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，但染色較淺；Disse間隙著色與模型組比較變淺，陽(yáng)性細(xì)胞記數(shù)與模型組比較明顯降低，有顯著性差異(P＜O.05)，與陽(yáng)性對(duì)照組比較明顯降低，有顯著性差異(P＜O.05)。 結(jié)論：1本研究用豬血清腹腔注射復(fù)制大鼠肝纖維化動(dòng)物模型，經(jīng)肝組織病理得到證實(shí)，模型復(fù)制成功。2以解毒化濁軟肝法立法所制的