化濁解毒軟肝湯對肝纖維化大鼠的療效及其作用機制探討.pdf

1、肝纖維化（Liver fibrosis）是各種慢性肝病向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)之路，其形成與發(fā)展己成為影響諸多肝病預(yù)后和轉(zhuǎn)歸的關(guān)鍵。在我國，HBV感染者達1.5億，其中慢性乙型肝炎患者約1500萬人，后者又有近30％發(fā)展為肝硬化，部分甚至發(fā)展為肝癌。同時，隨著人們生活水平和生活方式的改變，酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病率不斷上升，兩者都可經(jīng)過肝纖維化發(fā)展為肝硬化。因此，肝纖維化的防治具有重要意義。導(dǎo)師李佃貴教授總結(jié)多年臨床經(jīng)驗提出：肝炎

2、病毒屬濁毒之邪，因為正氣虧虛、情志抑郁等原因，濁毒之邪侵犯肝臟，糾纏日久留戀不去，導(dǎo)致肝之氣機阻滯，氣滯則生濕成瘀，濕久再成濁，瘀久化熱又為毒，毒借濁質(zhì)，濁挾毒性，濁毒反復(fù)糾纏，膠結(jié)滯于脅下，疾病始生，而其病機關(guān)鍵在于濁毒內(nèi)滯。故以化濁解毒軟肝法立法恰切病機，在此法指導(dǎo)下，創(chuàng)化濁解毒軟肝湯，在臨床上治療本類疾病，亦取得了良好效果。為進一步研究此法對肝纖維化大鼠肝星狀細胞（HSC）的影響，以探討化濁解毒法防治肝纖維化的作用機理，為肝纖維化

3、的防治提供新的思路。
　　 目的：探討化濁解毒軟肝湯對四氯化碳（Carbon Tetrachloride，CCl4）誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型中肝星狀細胞（Hepatic Stellate cell，HSC）活化相關(guān)細胞因子表達的影響，以進一步明確其抗肝纖維化作用機制。
　　 方法：
　　 1、將60只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠隨機分為空白對照組、復(fù)方鱉甲軟肝片對照組、模型組和化濁解毒軟肝湯低、高劑

4、量組，每組各為12只。
　　 2、模型組以40％CCl4腹腔注射，每周2次，共6周；空白對照組以等量生理鹽水代替CCl4注射；化濁解毒軟肝湯組除腹腔注射40％CCl4外，化濁解毒軟肝湯，按高劑量組按8ml/只/天，低劑量組按4ml/只/天灌胃，對照組和復(fù)方鱉甲軟肝片組分別以生理鹽水、復(fù)方鱉甲軟肝片混濁液（復(fù)方鱉甲軟肝片，為成人（60Kg）劑量的7倍）。給藥時間為每天上午10點，每6天休息一天，持續(xù)6周。
　　 3、6周后

5、取血測定各組大鼠血清透明質(zhì)酸、層粘連蛋白、血小板衍生生長因子和轉(zhuǎn)化生長因子-β1的含量，并比較各組測定值差異；
　　 取肝組織行病理檢查及免疫組化染色，觀察各組肝細胞變化和纖維增生程度以及α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1表達的差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、模型組血清中HA、LN、PDGF和TGF-β1的含量增加，較對照組和各化濁解毒軟肝湯組明顯升高（P<0.05）。化濁解毒軟肝湯可顯著降低上述血清指標(biāo)，

6、其作用強度具有劑量依賴性。
　　 2、肝組織H.E和V-G染色顯示：模型組肝細胞變性、壞死明顯比對照組和治療組嚴(yán)重，纖維明顯增生。各化濁解毒軟肝湯組隨化濁解毒軟肝湯劑量增加，肝細胞變性、壞死程度減輕，纖維增生減少。
　　 3、肝組織免疫組化顯示：α-sMA、PDGF-BB和TGF-β1對照組不表達或微量表達。模型組α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1的表達明顯增強，較復(fù)方鱉甲軟肝片組和各化濁解毒軟肝湯組高。化濁解毒軟

7、肝湯可顯著減少α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1的表達，其作用強度具有劑量依賴性。
　　 結(jié)論：
　　 1、40％CCl4 1ml/kg腹腔注射（每周兩次，間隔2～3天），6周可以成功制作大鼠肝纖維化模型。
　　 2、化濁解毒軟肝湯具有抗大鼠肝纖維化的作用，可降低大鼠肝纖維化模型中HA、LN、PDGF和TGF-β1的含量，其作用強度具有劑量依賴性。
　　 3、化濁解毒軟肝湯可抑制大鼠肝纖維化模型中α