肝寶膠囊治療肝纖維化的作用及其機(jī)理研究.pdf

1、目的:研究口服肝寶膠囊對(duì)二甲基亞硝胺(DMN)及硫代乙酰胺（TAA）誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型的治療作用，探討其作用機(jī)理，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。
　　方法:雄性SD大鼠分為溶劑對(duì)照鼠和模型鼠。模型鼠給予0.5％DMN腹腔注射（10mg/kg，每周3次，連續(xù)4周）制備大鼠肝纖維化模型后，再分為模型對(duì)照組和藥物組。藥物處理動(dòng)物分為肝寶膠囊2.0g原生藥/kg、肝寶膠囊4.0g原生藥/kg、肝寶膠囊8.0g原生藥/kg、扶正化瘀膠囊3.0g/k

2、g及雙環(huán)醇0.2g/kg，分別給予相應(yīng)劑量藥物，每天1次，持續(xù)4周。末次給藥后24h，檢測(cè)大鼠體重、肝重、肝血流量、肝門(mén)靜脈壓，檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)，總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)以及α-2巨球蛋白(α-2MG)、層黏蛋白(LN)水平;檢測(cè)肝臟羥脯氨酸(Hyp)含量;檢測(cè)肝內(nèi)IL-1α、IL-4、IL-1β、IL-6、IFN-γ、IL-18、TNF-α、 TGF-β1、TGF-β2、

3、TGF-β3、MMP2、MMP8、TGFβRⅡ、P-ERK/MAPK1/2、P-Smad2、P-AKT、P-Smad3、Smad4;肝臟HE、Masson染色觀察組織形態(tài)變化和肝內(nèi)膠原沉積情況，免疫組化染色檢測(cè)肝內(nèi)α-SMA表達(dá)。
　　雄性SD大鼠分為溶劑對(duì)照鼠和模型鼠。模型組大鼠自由飲用TAA水溶液（0.03％ TAA飲用9周后改用0.04％TAA飲用14周），造模15周時(shí)隨機(jī)抽取2只動(dòng)物作病理檢查、確定造模成功后繼續(xù)給予造模藥

4、8周。在造模15周時(shí)，模型動(dòng)物分為模型對(duì)照組和藥物組。藥物處理動(dòng)物分為肝寶膠囊2.0g原生藥/kg、肝寶膠囊4.0g原生藥/kg、肝寶膠囊8.0g原生藥/kg、扶正化瘀膠囊3.0g/kg及雙環(huán)醇0.2g/kg，分別給予相應(yīng)劑量藥物，每天1次，持續(xù)8周。末次給藥后24h，檢測(cè)大鼠體重、肝重、肝血流量、肝門(mén)靜脈壓，檢測(cè)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)，總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(T-BiL

5、)、血管緊張素Ⅱ（ANGⅡ）、Ⅳ型膠原(Col.Ⅳ)以及層黏蛋白(LN)水平;檢測(cè)肝內(nèi)羥脯氨酸(Hyp)含量;檢測(cè)肝內(nèi)IFN-γ、 TGF-β1、 PDGF-BB、IL-1α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-18、MIP-1α、MIP-2、MCP-1、TNF-α、P-CREB、P-JNK、P-NF-kB、P-P38、P-ERK1/2、P-Akt、P-p70S6K、P-STAT3、P-STA

6、T5;肝臟HE、Masson染色觀察組織形態(tài)變化和肝內(nèi)膠原沉積情況，免疫組化染色檢測(cè)肝內(nèi)α-SMA表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.肝寶膠囊對(duì)DMN誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型的治療作用
　　模型對(duì)照組大鼠肝臟絕對(duì)重量及肝臟系數(shù)、血清TP及ALB含量較溶劑對(duì)照組有顯著下降(p＜0.05);肝內(nèi)血流量較溶劑對(duì)照組有輕度下降;模型對(duì)照組大鼠血清ALT、AST、ALP、肝內(nèi)Hyp、肝門(mén)靜脈壓、肝纖維化程度、肝膠原容積百分比較溶劑對(duì)照組有顯

7、著升高(p＜0.05)。
　　肝寶膠囊2.0g原生藥/kg組肝臟絕對(duì)重量及肝臟系數(shù)、血清TP及ALB含量較模型對(duì)照組有一定程度增加;肝內(nèi)Hyp含量、肝門(mén)靜脈壓、肝纖維化程度、肝膠原容積百分比較模型對(duì)照組有顯著降低(p＜0.05);血清ALT、 AST、 ALP含量較模型對(duì)照組有一定程度降低。
　　肝寶膠囊4.0g原生藥/kg組肝臟系數(shù)較模型對(duì)照組有顯著升高(p＜0.05);肝臟絕對(duì)重量較模型對(duì)照組有一定程度增加;肝纖維化程度

8、、肝膠原容積百分比較模型對(duì)照組有顯著降低(p＜0.05);血清AST及ALP含量、肝內(nèi)Hyp含量、肝門(mén)靜脈壓較模型對(duì)照組有一定程度降低。
　　肝寶膠囊8.0g原生藥/kg組肝臟系數(shù)較模型對(duì)照組有顯著升高(p＜0.05);肝臟絕對(duì)重量、血清ALB含量、肝內(nèi)血流量較模型對(duì)照組有一定程度增加;肝內(nèi)Hyp含量、肝纖維化程度、肝膠原容積百分比較模型對(duì)照組有顯著降低(p＜0.05);血清ALT、AST及ALP含量、肝門(mén)靜脈壓較模型對(duì)照組有一定

9、程度降低。
　　2.肝寶膠囊對(duì)DMN誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型的治療機(jī)理研究
　　模型對(duì)照組大鼠血清α-2MG、肝內(nèi)MMP-2、TGFβ-1、TGFβ-2、TGFβ-3、α-SMA陽(yáng)性表達(dá)率較溶劑對(duì)照組有顯著升高(p＜0.05);血清LN、肝內(nèi)MMP-2較溶劑對(duì)照組有輕度升高;肝內(nèi)IL-1α、IL-1β、IL-4、IL-6、INF-γ、 TNF-α、P-Akt、Smad4較溶劑對(duì)照組有顯著下降(p＜0.05);肝內(nèi)IL-18較溶劑

10、對(duì)照組有輕度下降。
　　肝寶膠囊2.0g原生藥/kg組肝內(nèi)IL-4、IL-6、Smad4較模型對(duì)照組有一定程度增加;肝內(nèi)IL-1β、MMP-2、TGFβ-2、α-SMA陽(yáng)性表達(dá)率較模型對(duì)照組有顯著降低(p＜0.05);肝內(nèi)IL-1α、TGFβ-1、TGFβ-3、TGFβRⅡ、P-ERK/MAPK1/2較模型對(duì)照組有一定程度降低。
　　肝寶膠囊4.0g原生藥/kg組血清α-2MG、LN、IL-4、IL-6、Smad4較模型對(duì)照

11、組有一定程度增加;肝內(nèi)IL-1β、α-SMA陽(yáng)性表達(dá)率較模型對(duì)照組有顯著降低(p＜0.05);肝內(nèi)IL-1α、TGFβ-1、TGFβ-2、TGFβ-3、TGFβRⅡ、P-ERK/MAPK1/2較模型對(duì)照組有一定程度降低。
　　肝寶膠囊8.0g原生藥/kg組血清α-2MG、LN、IL-4、IL-6、INF-γ、Smad4較模型對(duì)照組有一定程度增加;肝內(nèi)TGFβ-3、α-SMA陽(yáng)性表達(dá)率較模型對(duì)照組有顯著降低(p＜0.05);肝內(nèi)IL

12、-1α及IL-1β、TGFβ-2較模型對(duì)照組有一定程度降低。
　　3.肝寶膠囊對(duì)TAA誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型的治療作用
　　模型對(duì)照組大鼠肝臟系數(shù)、血清ALT、AST、ALP、T-BiL、肝內(nèi)Hyp、肝門(mén)靜脈壓、肝纖維化程度、肝膠原容積百分比較溶劑對(duì)照組有顯著升高(p＜0.05);肝血流量較溶劑對(duì)照組有顯著降低(p＜0.05);血清TP較溶劑對(duì)照組有一定程度降低。
　　肝寶膠囊2.0g原生藥/kg組大鼠血清TP、肝血流量

13、較模型對(duì)照組有顯著升高(p＜0.05);大鼠血清ALT、AST、ALP、T-BiL、肝膠原容積百分比較模型對(duì)照組有顯著降低(p＜0.05);肝內(nèi)Hyp、肝門(mén)脈壓、肝纖維化程度較模型對(duì)照組有一定程度降低。
　　肝寶膠囊4.0g原生藥/kg組大鼠血清TP、肝血流量較模型對(duì)照組有顯著升高(p＜0.05);大鼠血清ALP、T-BiL、肝門(mén)脈壓、肝膠原容積百分比較模型對(duì)照組有顯著降低(p＜0.05);血清ALT、肝內(nèi)Hyp、肝纖維化程度較模

14、型對(duì)照組有一定程度降低。
　　肝寶膠囊8.0g原生藥/kg組大鼠血清TP、ALB、肝血流量較模型對(duì)照組有顯著升高(p＜0.05);血清ALP、T-BiL、肝內(nèi)Hyp、肝纖維化程度、肝膠原容積百分比較模型對(duì)照組有顯著降低(p＜0.05);血清ALT、肝門(mén)脈壓較模型對(duì)照組有一定程度降低。
　　4.肝寶膠囊對(duì)TAA誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型的治療機(jī)理研究
　　模型對(duì)照組大鼠血清ANG-Ⅱ、肝內(nèi)IL-18、α-SMA陽(yáng)性表達(dá)率較溶劑

15、對(duì)照組有顯著升高(p＜0.05);血清Col.Ⅳ、肝內(nèi)TGF-β1、MIP-2較溶劑對(duì)照組有一定程度升高;肝內(nèi)IL-1α、 IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10、IL-12p70、TNF-α、 MCP-1、P-JNK、P-NF-kB、P-Akt、P-CREB、STAT3、STAT5、p70S6K較溶劑對(duì)照組有顯著下降(p＜0.05)。
　　肝寶膠囊2.0g原生藥/kg組大鼠肝內(nèi)IL-6、P-JNK、P-NF-kB、P-Akt

16、較模型對(duì)照組有顯著升高(p＜0.05);肝內(nèi)IL-1α、 IL-1β、IL-4、IL-10、IL-12p70、P-NF-kB、P-CREB較模型對(duì)照組有一定程度升高;肝內(nèi)IFN-γ、肝α-SMA陽(yáng)性表達(dá)較模型對(duì)照組有顯著下降(p＜0.05)。
　　肝寶膠囊4.0g原生藥/kg組大鼠肝內(nèi)IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10、P-NF-kB、P-Akt、P-CREB較模型對(duì)照組有顯著升高(p＜0.05);肝內(nèi)IL-1α、IL-1

17、2p70、P-JNK較模型對(duì)照組有一定程度升高;肝α-SMA陽(yáng)性表達(dá)較模型對(duì)照組有顯著降低(p＜0.05);肝內(nèi)IFN-γ、 IL-18、MIP-2較模型對(duì)照組有一定程度降低。
　　肝寶膠囊8.0g原生藥/kg組大鼠肝內(nèi)IL-6較模型對(duì)照組有顯著升高(p＜0.05);肝內(nèi)IL-1α、IL-4、IL-10、IL-12p70、P-Akt、P-CREB較模型對(duì)照組有一定程度升高;肝內(nèi)IL-18、肝α-SMA陽(yáng)性表達(dá)較模型對(duì)照組有顯著降低

18、(p＜0.05);肝內(nèi)IFN-γ、TGF-β1、MIP-1α、MIP-2較模型對(duì)照組有一定程度降低。
　　結(jié)論:肝寶膠囊對(duì)DMN及TAA誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化均有較好的治療效果。
　　肝寶膠囊通過(guò)以下幾個(gè)方面治療肝纖維化:促進(jìn)肝細(xì)胞及巨噬細(xì)胞合成和分泌α-2MG，通過(guò)α-2MG載體效應(yīng)減少肝內(nèi)IL-1及TGF-β水平，減少TGF-βⅡ型受體數(shù)量，降低ERK/MAPK、Smad3磷酸化水平，激活JNK、NF-Kb、AKt、CREB