PinlshRNA慢病毒載體構(gòu)建及其對(duì)高氧誘導(dǎo)人肺泡上皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、本研究基金來(lái)源：1中華兒科雜志第二屆雙鶴珂立蘇科研基金(編號(hào)：cjp009)2四川省教育廳科研項(xiàng)目基金(編號(hào)：08ZAISO一033)3四川省衛(wèi)生廳科研基金(編號(hào)：110340)4瀘州市科技局(瀘州市政府瀘州醫(yī)學(xué)院聯(lián)合專項(xiàng)資金)(編號(hào)：2013LZLYJ08)PinlshRNA慢病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)高氧誘導(dǎo)人肺泡上皮細(xì)胞凋亡的影響摘要目的：Pinl是人類肽基脯氨酰異構(gòu)酶，現(xiàn)在主要用于研究抑制腫瘤細(xì)胞的靶點(diǎn)。而目前研究發(fā)現(xiàn)，Pinl參與氧

2、化應(yīng)激通路，抑制其表達(dá)將可能減少高氧肺損傷，但具體作用機(jī)制研究鮮有報(bào)道。RNAi技術(shù)是目前公認(rèn)能夠快速有效的基因沉默方式，其可高效、特異性下調(diào)目標(biāo)基因的表達(dá)，研究基因功能和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，越來(lái)越受到人們的關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)擬構(gòu)建PinlshRNA慢病毒載體，建立穩(wěn)定抑制肽基脯氨酰順?lè)串悩?gòu)酶(Pinl)表達(dá)的A549細(xì)胞系，從而探討Pinl在氧化應(yīng)激通路介導(dǎo)高氧誘導(dǎo)人肺泡II型上皮A549細(xì)胞凋亡的影響，抑制其表達(dá)后是否對(duì)高氧誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞的保

3、護(hù)作用。方法：根據(jù)查閱文獻(xiàn)獲得PinlshRNA干擾靶點(diǎn)序列并插入pLenRGPH載體，構(gòu)建pLenRGPHPinlshRNA慢病毒載體，隨后轉(zhuǎn)入人胚腎HEK293T細(xì)胞中，收集其上清進(jìn)行病毒滴度測(cè)定，再行慢病毒的包裝，將獲得的慢病毒毒液感染A549。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR(qRTPCR)及Westernblot法檢測(cè)Pinl在不同組的表達(dá)抑制情況，最終獲得穩(wěn)定抑制Pinl表達(dá)的A549PinlshRNA細(xì)胞系。隨后將實(shí)驗(yàn)分為四組：空氣組、