Cdx2和E2F-1基因?qū)ξ赴┘?xì)胞生物學(xué)性狀影響的研究.pdf

1、我國(guó)胃癌發(fā)病率仍然居所有癌腫的第一位，死于胃癌人數(shù)約占全球該病死亡總?cè)藬?shù)的1/4。多數(shù)患者為進(jìn)展期晚期胃癌，手術(shù)根治率低，術(shù)前術(shù)后放化療效果差，毒副作用大，至今沒(méi)有統(tǒng)一的化療方案，因而腫瘤的基因治療有望成為一種新的治療策略。細(xì)胞的失調(diào)控的異常增殖和凋亡的抑制是腫瘤發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。Cdx2是最近發(fā)現(xiàn)的特異性核轉(zhuǎn)錄因子，最早由Mlodzik于果蠅中分離成功，發(fā)現(xiàn)與parahox家族呈高度的同源性。在正常生物發(fā)育過(guò)程中，Cdx2對(duì)消化道特別是

2、結(jié)腸和小腸上皮的發(fā)育起著關(guān)鍵的作用。研究發(fā)現(xiàn)，Cdx2基因過(guò)表達(dá)可抑制結(jié)腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。關(guān)于E2F-1基因，最初被認(rèn)為是一致癌基因，因?yàn)樗ㄟ^(guò)刺激細(xì)胞周期從G1期向S期轉(zhuǎn)變的基因表達(dá)，可以促進(jìn)細(xì)胞的增殖。并且E2F-1的過(guò)度表達(dá)可以刺激靜止期細(xì)胞向S期轉(zhuǎn)變。此外，在HNSCC細(xì)胞株中，E2F-1的過(guò)度表達(dá)可以刺激細(xì)胞重新進(jìn)入細(xì)胞周期，并增加細(xì)胞的侵襲力，這些表明E2F-1在細(xì)胞周期的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中起到致癌基因的作用。另一方面，在多種細(xì)胞

3、中，過(guò)度表達(dá)E2F-1可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，表明是一種抑癌基因。而且，最近研究，敲除E2F-1基因的小鼠也表明了其抑癌基因的作用。 本研究擬通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)，探討Cdx2和E2F-1基因?qū)ξ赴┘?xì)胞生物學(xué)性狀的影響，分析Cdx2和E2F-1基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中的可能作用。 1方法1.1 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞并鑒定Cdx2和E2F-1基因的表達(dá)利用脂質(zhì)體Lipofectamine 2000瞬時(shí)轉(zhuǎn)染MGC-803胃癌細(xì)胞，抽提轉(zhuǎn)染48h后細(xì)

4、胞總RNA和蛋白，通過(guò)RT-PCR和 Western blot檢測(cè)Cdx2和E2F-1在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)情況。 1.2轉(zhuǎn)染后的體外實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)分三組，取48h轉(zhuǎn)染pCMV-Cdx2-HA 和pCMV-E2F-1-HA細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組，轉(zhuǎn)染pCMV-HA和未轉(zhuǎn)染MGC-803分別為空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組。鑒定轉(zhuǎn)染Cdx2和E2F-1成功的MGC-803細(xì)胞分別做侵襲實(shí)驗(yàn)、粘附實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、克隆實(shí)驗(yàn)和測(cè)定細(xì)胞凋亡率。

5、 2結(jié)果 2.1瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后應(yīng)用RT-PCR和Western blot分別檢測(cè)到了Cdx2和E2F-1基因的表達(dá)。 2.2轉(zhuǎn)染pCMV-Cdx2-HA質(zhì)粒的MGC-803細(xì)胞的侵襲力、粘附能力、遷移能力和增殖力較轉(zhuǎn)染pCMV-HA質(zhì)粒的MGC-803細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染的MGC-803細(xì)胞明顯降低(P