不同年齡段、不同取材部位大鼠脂肪間充質干細胞生物學特性的對比研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　成體間充質干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具有多向分化能力,研究證實MSCs可分化為胃腸道上皮細胞,有望通過移植MSCs來修復損傷的胃黏膜上皮組織,恢復黏膜原有的防御屏障功能并提高潰瘍愈合質量(quality of ulcer healing,QOUH),從而達到治療并防止消化性潰瘍(pepticulcer,PU)復發(fā)的目的。國外有研究采用骨髓間充質干細胞(bone marro

2、w derived stem cell,BSCs)治療胃潰瘍(gastric ulcer,GU)并取得了令人鼓舞的結果,證實了通過移植BSCs可加速潰瘍的愈合。然而,由于BSCs的數(shù)量少,僅占骨髓有核細胞的0.001％～0.01%,并且獲取骨髓組織時創(chuàng)傷性大,這使得BSCs的臨床應用前景受到了限制。脂肪間充質干細胞(adipose-derived stromal cells,ASCs)作為其中一種MSCs,具有細胞數(shù)量大、取材創(chuàng)傷性小、

3、可上皮細胞分化、無免疫排斥反應等優(yōu)點。利用ASCs移植治療GU,有可能會成為一種新穎、有效的治療手段。本研究旨在觀察SD大鼠ASCs的生物學特點與不同年齡、不同取材部位的關系,為ASCs移植胃潰瘍治療的實驗尋找理想的種子細胞提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　SD大鼠,雌、雄不限,分為1月齡(幼齡組)和12月齡(成年組)兩種,取腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織或腹股溝脂肪組織進行分離、培養(yǎng)與鑒定。隨機分為4組:A組為取材于腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織的

4、1月齡SD大鼠;B組為取材于腹股溝脂肪組織的1月齡SD大鼠;C組為取材于腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織的12月齡SD大鼠;D組為取材于腹股溝脂肪組織的12月齡SD大鼠;以Ⅰ型膠原酶消化脂肪組織后提取ASCs進行貼壁培養(yǎng),相差顯微鏡下觀察ASCs的形態(tài),繪制細胞生長曲線,并用流式細胞術鑒定第四代ASCs的表面標志物CD29,CD45,CD90的表達率。
　　結果：
　　1、四組SD大鼠培養(yǎng)出的細胞均貼壁生長,以梭形為主,部分呈星形或多角形

5、,符合間充質干細胞形態(tài)特征,各組原代細胞與傳代細胞在形態(tài)學上無明顯差異。
　　2、四組SD大鼠第4代ASCs的生長曲線均呈S型;ASCs生長的潛伏期、進入平臺期時間在四組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　3、1月齡組與12月齡組的ASCs在細胞倍增時間上差異具有顯著統(tǒng)計學差異(P<0.01),不同部位間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　4、第四代ASCs免疫表型結果:CD29和CD90呈明顯陽性,而CD4

6、5呈明顯陰性,符合間充質干細胞表型特征。三種免疫表型的陽性或陰性表達率在不同月齡及不同取材部位的四組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論：
　　通過酶消化法獲得的SD大鼠的脂肪組織間充質干細胞,細胞貼壁生長,呈現(xiàn)類似成纖維細胞樣形態(tài)學特征,免疫表型顯示CD29和CD90呈陽性,而CD45呈陰性,符合間充質干細胞的特征。1月齡SD大鼠的ASCs的增值活性優(yōu)于12月齡組,腹腔大網(wǎng)膜脂肪組織與腹股溝脂肪組織來源的ASCs