肝硬變組織中變異肝細胞結節(jié)的檢出及其遺傳學改變.pdf

1、目的:
　　 肝細胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是人類最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)生機制尚未完全闡明。對肝移植時取出的病肝進行的觀察顯示,變異肝細胞病灶(focus of altered hepatocytes,FAH)是最早期、最常見的一類腫瘤前期病變,它們可能通過形成變異肝細胞結節(jié)(nodule of altered hepatocytes,NAH)和/或小細胞性改變(small-cell c

2、hange,SCC)進展為HCC。本研究觀察了50例HCC切除標本,從癌周肝組織中檢出了NAH和SCC改變,并對經顯微切割分離的50個NAH病變進行了多個位點的雜合性丟失(loss of heterozygosity,LOH)的分析,以期能證實它們與HCC的關系及其相關的遺傳學改變。
　　 方法:
　　 選擇50例HCC和1例不典型腺瘤樣增生(atypical adenomatoid hyperplasia,AAH)切除

3、標本,對腫瘤周圍肝組織進行組織學和免疫組織化學觀察,按已經建立的標準檢出不同類型的FAH和NAH,并對是否伴有SCC及其級別進行評判。應用61個微衛(wèi)星位點分析檢測22例HCC組織的LOH。選出代表性位點28個,對通過顯微切割分離的50個NAH和5個普通再生結節(jié)(regenerative nodule,RN)進行LOH分析。同一個位點LOH發(fā)生率達到20％者被認為是頻繁發(fā)生(頻發(fā))事件,達到30％者被認為是高度頻繁(高頻)發(fā)生,同一類病變

4、發(fā)生LOH的平均數(shù)被稱為等位基因失衡指數(shù)(allelic imbalance index,AII)。并挑選可能與LOH發(fā)生相關的5種蛋白標志物進行免疫組織化學檢測,以初步了解其功能改變。
　　 結果:
　　 共觀察了50例HCC切除標本,癌周肝組織均呈慢性肝炎表現(xiàn),其中38例(76％)伴有肝硬變。這些標本中,均檢出FAH和NAH。在33例(66％)標本中查見SCC,均為低級別SCC。硬變癌周組織中SCC病變檢出率為81.

5、6％(31/38),高于不伴有肝硬變者(2/12,16.7％；P<0.05)。
　　 對1例AAH的觀察顯示,此病變由多個NAH構成,多數(shù)伴有高級別的SCC改變。
　　 挑選7例EdmondsonⅠ級、11例Ⅱ級和4例Ⅲ級HCC標本進行LOH分析。結果顯示,Ⅰ級HCC標本的LOH檢出率為86％(6/7),Ⅱ級HCC標本的LOH檢出率為82％(9/11),而Ⅲ級標本均顯示出等位基因失衡。三組標本的AII分別為6.3(0-1

6、0個)、3.3(0-12個)和8.5(3-16個)。
　　 檢測的61個位點中,43個(70％)在至少1例標本中發(fā)生了LOH。其中D16S3029位點的LOH頻率最高,為43％(6/14),其它高頻缺失的位點包括D11S2008(42％,8/19)、D17S796(40％,8/20)、D11S1301(37％,7/19)、D8S261(36％,4/11)、D6S1008(31％,4/13)和D17S1840(30％,6/20),

7、分別位于6q、8p、11p、16q及17p。
　　 根據(jù)上述對HCC的觀察,選擇28個代表性位點,對NAH(n=50)以及RN(n=5)進行了LOH分析。17個不伴有SCC的NAH標本中,14個(82％)至少在一個位點上顯示出等位基因失衡,AII為2.3(0-6個)；33個伴有SCC的NAH中,28個(85％)顯示出等位基因失衡,AII為3.2(0-8個)；22例HCC標本中,28個位點的檢測結果顯示,19例(86％)顯示出LO

8、H,AII為5.4(0-12個),高于NAH以及伴有SCC的NAH(P<0.05)；檢測的5例RN均未顯示出LOH。這些數(shù)據(jù)進一步證實,與RN不同,大多數(shù)NAH病變已經屬于克隆性增生,不管是否伴有SCC。
　　 我們的結果還顯示,不伴有SCC的NAH和伴有SCC的NAH改變攜帶有特征性的遺傳學改變,前者中,LOH頻發(fā)位點包括D8S1754(4/16,25％)、D11S1301(6/13,46.2％)和D17S796(4/17,2

9、3.5％),而后一組病變的LOH頻發(fā)位點包括D6S1008(7/32,21.9％)、D11S1301(9/29,31％)、D11S2008(7/33,21.2％)和D17S695(6/29,20.7％)。與HCC病變的LOH發(fā)生譜相對照,顯示D11S1301、D17S796等位點的LOH從SCC發(fā)生之前就存在,提示可能與HCC發(fā)生的早期事件相關；D17S695等位點見于伴有SCC的NAH病變和HCC,提示可能與SCC的發(fā)生有關；D17S

10、1840、D17S926等僅見于HCC,提示可能與肝細胞腫瘤惡性轉化階段有關系。
　　 按照以上LOH結果,我們選出可能與LOH相關的5種蛋白進行免疫組織化學檢測。50例HCC病例中,隨著病理學分級的升高,p53蛋白表達水平有增加的趨勢；XA目的表達在FAH/NAH與伴有SCC的FAH/NAH和肝細胞癌間的差異不具有統(tǒng)計學意義；WWOX清晰地勾勒出癌旁組織中的FAH/NAH,WWOX在FAH/NAH和HCC中的表達較正常肝組織顯

11、著降低,提示我們WWOX可能參與HCC形成的早期過程；而β-catenin和E-cadherin在三組間的表達無統(tǒng)計學差異。
　　 結論:
　　 通過對手術切除標本的觀察,證實了NAH是廣泛存在的,肝硬變組織中SCC的檢出率明顯高于不伴肝硬變的組織。
　　 不管是否伴有SCC,多數(shù)NAH均可檢測到LOH,表明它們都是克隆性增生,屬于微小肝細胞腺瘤,相當于肝實質上皮內腫瘤(hepatic intraepitheli

12、al neoplasia,HIN)。
　　 NAH及伴有SCC的NAH中發(fā)生的LOH改變都見于HCC標本,證實這兩種病變都是HCC前期改變,代表了HCC發(fā)生的不同階段。它們之間在LOH發(fā)生譜上的不同提示NAH的發(fā)生、進展(SCC發(fā)生)以及充分惡性表型的出現(xiàn)可能涉及不同的遺傳學改變。
　　 WWOX在伴/不伴有SCC的NAH和HCC中的表達較結構正常肝組織明顯降低,提示其可能參與HCC形成的早期過程,可能與16q的LOH相