Hsf1—一種新的睪丸支持細(xì)胞雄激素受體靶基因.pdf

1、目的:探討雄激素受體(AR)對睪丸支持細(xì)胞中熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(Hsf1)基因表達(dá)的影響及其作用的分子機(jī)制。
　　方法:采用PCR、Westernblot的方法,比較AR特異性敲除(S-AR-/y)小鼠和野生型(WT)小鼠睪丸組織中的Hsf1表達(dá)差異以及雄激素及雄激素受體結(jié)合對TM4細(xì)胞系中Hsf1和HSPs表達(dá)水平的影響;采用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)(Luciferasereport)、凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)(Electrophore

2、ticmobilityshiftassay,EMSA)和染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)(Chromatinimmunoprecipitationassay,ChIP),探討AR調(diào)控Hsf1基因表達(dá)的分子機(jī)制。
　　結(jié)果:RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果及WesternBlot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與WT小鼠比較,S-AR-/y小鼠睪丸組織中Hsf1表達(dá)水平顯著升高;雄激素顯著降低經(jīng)過AR轉(zhuǎn)染的TM4細(xì)胞中Hsf1mRNA和HSF1蛋白表達(dá)水平。并且Wester

3、nBlot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):HSF1能夠升高熱休克蛋白105(HSP105)和HSP60水平,但對HSP27、HSP40、HSP70和HSP90無明顯影響。EMSA、CHIP實(shí)驗(yàn)及Luciferase實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:AR通過特異性結(jié)合Hsf1基因上游啟動子上的雄激素作用元件,進(jìn)而抑制Hsf1基因表達(dá)。
　　結(jié)論:生精過程中一條可能的信號通路:AR突變或缺陷→Hsf1基因過表達(dá)→HSP60和HSP105表達(dá)上調(diào)→生殖細(xì)胞凋亡,生精阻滯。Hsf