牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟的研究.pdf

1、本研究利用屠宰牛的卵巢，先用抽吸法收集卵巢表面直徑為2～8mm卵泡液，然后，用切割法獲取卵巢表面直徑2mm以下的小腔卵泡卵母細(xì)胞。對(duì)獲得的A、B級(jí)小腔卵泡卵母細(xì)胞進(jìn)行體外成熟培養(yǎng)、體外受精培養(yǎng)和受精卵的體外培養(yǎng)的研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.本研究探討了牛卵巢保存溫度以及育成牛和經(jīng)產(chǎn)生卵巢對(duì)牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟的影響。結(jié)果表明：卵巢保存溫度在31～37℃時(shí)，可用卵母細(xì)胞數(shù)和成熟的小腔卵泡卵母細(xì)胞數(shù)均較多；經(jīng)產(chǎn)生小腔卵泡卵母細(xì)胞

2、體外成熟效果好于育成牛。 2.比較不同的激素組合(FSH/LH、FSH/hCG和hCG/PMSG)對(duì)牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟的影響。結(jié)果表明：對(duì)照組1牛小腔卵泡卵母細(xì)胞的成熟率最低(6.52％)，且與第2、3、4相比均差異顯著(P<0.05)；第3組卵母細(xì)胞的成熟率最高(23.00％)，但與第2、4兩組牛小腔卵泡卵母細(xì)胞的成熟率間差異不顯著(P>0.05)。 3.在成熟培養(yǎng)液中分別添加0％、5％、15％和20％的FCS

3、。結(jié)果表明：在成熟培養(yǎng)液中添加適量的FCS顯著促進(jìn)牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟(P<0.05)，其中添加15％(v/v)的FCS組的牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟率最高，添加10％(v/v)的FCS組次之，但兩者間差異不顯著(P>0.05)。 4.添加0.05、0.1μmol/mL的β-巰基乙醇均能促進(jìn)牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟(P>0.05)，但添加0.2μmol/mL的β-巰基乙醇組顯著抑制牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟率(P<0.0

4、5)，以0.1μmol/mL的β-巰基乙醇組牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟率最高。 5.比較不同的直徑的卵泡液對(duì)牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟的影響。結(jié)果表明：與對(duì)照組1相比，第2組在培養(yǎng)液中添加直徑≤2mm的卵泡卵泡液，卵母細(xì)胞的成熟率降低，但二者差異不顯著(P>0.05)；第3組在培養(yǎng)液中添加直徑2～6mm的卵泡卵泡液顯著促進(jìn)牛小腔卵泡卵母細(xì)胞的成熟(P<0.05)，卵母細(xì)胞的成熟率最高。 6.比較在體外成熟培養(yǎng)液中分別添加

5、不同濃度的LIF和(或)胰島素對(duì)牛小腔卵泡卵母細(xì)胞體外成熟的影響。結(jié)果表明：在體外成熟培養(yǎng)液中同時(shí)添加LIF和胰島素的I-8組牛小腔卵泡卵母細(xì)胞的體外成熟率最高(35.78％)，而單獨(dú)添加胰島素的I-6組牛小腔卵泡卵母細(xì)胞的體外成熟率最低(22.12％)；I-8組與I-6組間牛小腔卵泡卵母細(xì)胞的成熟率差異顯著(P<0.05)，但與對(duì)照組I-1以及其它各組間成熟率均差異不顯著(P>0.05)。 7.比較了上浮法和Percoll密度