利用性成熟前山羊卵泡卵母細(xì)胞體外生產(chǎn)胚胎的研究.pdf

1、本研究以長江三角洲白山羊?yàn)檠芯繉?duì)象，分別研究了羔山羊不同日齡及激素劑量對(duì)卵泡發(fā)育及卵巢組織學(xué)的影響；與成年羊?qū)Ρ?，研究了性成熟前山羊卵母?xì)胞體外減數(shù)分裂進(jìn)程；體外培養(yǎng)成熟的卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精，研究了性成熟前山羊卵母細(xì)胞卵齡、成熟過程和受精過程中卵丘存在程度對(duì)卵母細(xì)胞發(fā)育能力的影響，并且比較了性成熟前山羊不同直徑卵母細(xì)胞體外發(fā)育能力，進(jìn)一步就卵母細(xì)胞體外受精及受精卵體外培養(yǎng)方案進(jìn)行了優(yōu)化，旨在提高性成熟前山羊卵泡卵母細(xì)胞體外胚胎生產(chǎn)效率

2、。 1．日齡和激素劑量對(duì)羔山羊COCs的獲得影響顯著。FSH處理后45日齡羔羊卵巢可見卵泡數(shù)、COCs數(shù)及未擴(kuò)展COCs數(shù)均顯著高于90日齡(P<0.05)。45日齡FSH70組卵泡數(shù)和COCs數(shù)顯著高于FSH 40組，但未擴(kuò)展COCs數(shù)低于FSH 40組。FSH70組裸卵比例較高，未擴(kuò)展COCs數(shù)較FSH 40組低。FSH 40組45日齡羔羊平均每只單側(cè)卵巢獲得可用卵母細(xì)胞23.33±1.53枚，顯著高于其它各組(P<0.05

3、)。切片組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)：FSH處理對(duì)原始卵泡、初級(jí)卵泡的直徑影響不顯著，但對(duì)卵子直徑影響顯著，均屬正常卵子直徑范圍內(nèi)(130～150μm)。FSH 40處理組生長卵泡數(shù)明顯高于FSH70處理組，其中FSH 70組卵泡較FSH 40組大。 2．成年山羊和性成熟前山羊卵母細(xì)胞體外成熟過程中減數(shù)分裂各時(shí)相出現(xiàn)時(shí)間不同。在整個(gè)體外成熟培養(yǎng)過程中，性成熟前山羊卵母細(xì)胞GV期存在時(shí)間較長(7.21h)，在成熟培養(yǎng)23.96h后才能進(jìn)入MⅡ期

4、；成年羊卵母細(xì)胞GV期存在時(shí)間相對(duì)較短(2.94h)，大約在成熟培養(yǎng)20.64h后，進(jìn)入MⅡ期。體外成熟培養(yǎng)24h和27h，成年羊卵母細(xì)胞成熟率差異不顯著，但是性成熟前山羊卵母細(xì)胞成熟率差異顯著(P<0.05)。與成年山羊相比，羔山羊卵母細(xì)胞孤雌發(fā)育能力較差，可能與其卵母細(xì)胞本身成熟缺陷有關(guān)。 3．體外成熟24h、27h和30h，性成熟前山羊卵母細(xì)胞受精率、卵裂率差異不顯著(P>0.05)，但顯著高于21h組(P<0.05)。成

5、熟24h和27h卵母細(xì)胞桑椹胚囊胚率顯著高于成熟21h和30h組(P<0.05)。 4．去除卵丘的卵母細(xì)胞和裸卵體外培養(yǎng)可以成熟，但受精率、卵裂率、桑椹胚囊胚率顯著低于帶卵丘的卵母細(xì)胞(P<0.05)。成熟前機(jī)械去除卵丘嚴(yán)重影響性成熟前山羊卵母細(xì)胞發(fā)育能力。1～3層和多層卵丘的卵母細(xì)胞受精率、卵裂率、桑椹胚囊胚率差異不顯著(P>0.05)。 5．性成熟前山羊卵母細(xì)胞受精前卵丘存在程度對(duì)其受精率和卵裂率影響不顯著(P>0.

6、05)，但受精前完全去掉卵丘嚴(yán)重影響胚胎后續(xù)發(fā)育能力，桑椹胚囊胚率顯著低于帶卵丘的卵母細(xì)胞。卵丘完整組與部分卵丘去除組卵母細(xì)胞體外發(fā)育能力差異不顯著。 6．性成熟前山羊卵母細(xì)胞GVBD發(fā)生率及成熟率隨其直徑的增加而顯著增加。成熟培養(yǎng)0h，直徑<110μm卵母細(xì)胞GV期比例顯著高于其它各組。隨著卵母細(xì)胞直徑的增加，GVBD發(fā)生率也增加。成熟培養(yǎng)27h，直徑>135μm組MⅡ期比率(75.00％)顯著高于其它組(P>0.05)，其中

7、直徑<110μm組卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)不能達(dá)到MⅡ期。 7．性成熟前山羊卵母細(xì)胞受精率、卵裂率隨其直徑的增加而顯著提高(P<0.05)。卵母細(xì)胞直徑<110μm、110～125μm、125～135μm組桑椹胚囊胚率差異不顯著(P>0.05)，但顯著低于直徑>135μm組(P<0.05)。 8．TALP液較BO液更適合性成熟前山羊卵母細(xì)胞體外受精所用。 9．SOFaa較CRlaa更適合性成熟前山羊早期胚胎體外培養(yǎng)所用。