膀胱移行細胞癌microRNAs的差異表達初步研究.pdf

1、目的:分離膀胱移行細胞癌中差異表達 microRNAs,用 miRNA芯片技術篩選差異表達 microRNAs,實時熒光定量 PCR驗證其表達量。探討差異表達microRNAs在膀胱移行細胞癌中的作用機制。
　　方法:取5例膀胱移行細胞癌(術前活檢及術后病理檢測結果均證實為膀胱移行細胞癌)患者手術切除的新鮮膀胱癌組織標本做為膀胱癌組;1例良性前列腺增生患者的膀胱粘膜組織標本做為對照組(與各樣本分別作對照)。Trizol法提取總 R

2、NA,用紫外線吸收測定法行 RNA質量檢測。采用 miRCURYTM Array Power標記試劑盒,用標記酶 Hy3TM熒光集團標記 miRNA得到用于與芯片雜交的熒光探針,在標準條件下使用 PhalanxTM的熱收縮雜交袋將標記好的探針和miRCURYTM芯片雜交。使用 GenePix4000B芯片掃描儀掃描芯片的熒光強度,并將實驗結果轉換成數(shù)字型數(shù)據(jù)保存。使用 Genepix Pro6.0軟件獲取熒光掃描圖像和對原始數(shù)據(jù)進行分析

3、運算。選取各樣本表達均上調(diào)及下調(diào)的miRNAs各5個,用實時熒光定量 PCR技術驗證芯片實驗結果。
　　結果:1﹑所提取的RNA經(jīng)過質量檢測符合芯片實驗需求。2﹑膀胱癌組分別和對照組芯片研究結果發(fā)現(xiàn)2340個 miRNA差異表達。有131個 miRNA在膀胱移行細胞癌中差異表達顯著且表達一致(其中43個表達顯著上調(diào),88個表達顯著下調(diào))。3﹑選取各膀胱癌標本中均表達顯著上調(diào)的has-miR-429, has-miR-29b, ha